Элективная окраска для микобактерий туберкулеза окраска

Во время работы в лаборатории производятся исследования аутопсийного материала. Под диктовку врача заполняется протокол вскрытия в 2-х экземплярах. Вырезаются кусочки секционного материала для дальнейшего исследования.

Так же в обязанности лаборанта-гистолога входит обработка цитологического материала:

1 При поступлении материала на цитологическое исследование в отделение лаборант гистолог проверяет соответствие доставленного материала и оформление цитологического направления

2 Регистрирует и дает порядковый номер цитологическому исследованию.

3 Подготавливает стекла к окраске, красит их и отдает врачу для микроскопирования и постановке цитологического диагноза.

Жидкости доставленные в лабораторию для исследования, центрифугируются, из осадка делается мазок на стекло, окрашивается и отдается врачу для микроскопирования и постановки диагноза.

При окраске цитологических препаратов мною освоена и внедрена методика окраски по Паппоникалау. Эта окраска позволяет улучшить диагностику и постановку цитологического диагноза.

Так же в 2015 году мною освоена станция для окраски стекол, что позволяет ускорить и улучшить качество окраски.. При приобретении лабораторией автом. имуно-стейнера мною осваивается работа на нем.

В работе патологоанатомического отделения используются следующие приборы:

1. Автоматический тканевой процессор с программным управлением для проводки гистологического материала с вакуумной пропиткой парафином.

2. Станция для заливки парафином LEICA 1150 .

Модульная установка для изготовления парафиновых блоков состоит из станции заливки парафином и охлаждающая плата.

3. Санные микротомы. В работе используются следующие виды санных микротомов:

4. Ротационные микротомы Микротом LEICA RM 2125

5. Иммуностейнер автоматический BenchMark -Ultra

6. Криостат LEICA CM 1510S- применяется для проведения срочных биопсий.

10. Центрифуга Cyto-tek (цитологическая)

13. Станция для окраски стекол Tissue-Tek Prisma

В 2015 году был приобретен и задействован в работе автоматических мультистейнер японской фирмы «Сакура», для одновременной автоматической окраски до 180 гистологических срезов. В кабинетах каждого врача установлены персональные компьютеры, куда вносятся результаты морфологических исследований и которые по внутренней больничной сети пересылаются в клинические отделения или в оперблок. Приобретенное высокотехнологичное оборудование освоено врачами и лаборантами, оно позволяет существенно сократить сроки проводимых исследований, улучшить их качество, повысить производительность и безопасность труда сотрудников. По отзывам онкологических учреждений города, гистологические микропрепараты ПАО КБ-122 в настоящее время отвечают самым высоким требованиям.

В настоящее время в состав ПАО входят 3 диагностические лаборатории: гистологическая, цитологическая, иммуногистохимическая, в результате чего ПАО является многопрофильным диагностическим подразделением больницы, в котором проводится весь ныне существующий спектр патоморфологической диагностики, что способствует значительному повышению качества и достоверности диагностического процесса. Техническая оснащенность позволили ПАО КБ-122 занять ведущие позиции в патоморфологической диагностике города. При гистологическом и гистохимическом методе диагностики широко исследуется операционный и биопсийный материал по всем разделам нозологии, любой категории сложности, в том числе эндоскопические биопсии желудочно-кишечного тракта и бронхиального дерева, а так же пункционные биопсии из ткани печени, молочной, щитовидной и предстательных желез и эндометрий полости матки, с целью прижизненного выявления различных заболеваний и особенной начальных форм рака различных органов и тканей, в том числе путем проведения экспресс-биопсий. Практически у каждого третьего стационарно лечившегося больного клинические диагнозы устанавливаются или подтверждаются с использованием результатов патоморфологической диагностики.

С целью централизации и совершенствования морфологической диагностики в состав ПАО, в числе первых в России, из КДЛ была проведена и развернута цитологическая лаборатория, что позволило проводить диагностику материалов в тех случаях, когда невозможно применить гистологический метод, проводить сопоставление результатов гистологического и цитологического исследования в особо сложных случаях, а так же проводить диагностику заболеваний в динамике для оценки лечебного патоморфоза. Таким метом исследуется гинекологический, эндоскопический материал ,а так же объекты из различных орагнов и тканей, получаемых методом тонкоигольной биопсии под контролем УЗИ. Проводится так же гормональная цитология и исследования эксофолиативного материала. Настоящим шагом вперед в диагностической работе ПАО явилось внедрение в работу иммуногистохимического метода исследования злокачественных новообразований, что позволяет не только верифицировать гистогенез опухолевых процессов, но и определять чувствительность рецепторов опухолевых клеток к назначаемой химио или гормональной терапии. Таким образом, в настоящее время ПАО проводятся все ныне существующие виды морфологической диагностики в объеме и качестве необходимые для работы многопрофильной клинической больницы № 122.

Успешная работа ПАО способствует не только улучшению лечебно-диагностической работы клинических отделений, но так же способствует повышению профессионального уровня врачей клиницистов путем проведения различных форм клинико-анатомической работы, такими как совместное обсуждение на КИЛИ, КПАК, ЛКК летальных исходов, с оценкой сроков госпитализации , своевременности и правильности прижизненной диагностики, качества проводимого лечения, а так же установление причин расхождений диагнозов и возникновение случаев ятрогенной патологии.

В ПАО постоянно совершенствуется организационные формы работы, а так же внедряются передовые методики морфологического исследования: Бригадная форма организации и оплаты труда сотрудников ПАО. Составлен и внедрен в работу регламент по доставке в ПАО операционного и биопсийного материала из клинических отделений. Достигнуто расширение иммуногистохимической методики по диагностике злокачественных новообразований. Внедрена методика по оценке степени активности хронического гепатита по методу Кноделя. Оценка степени злокачественности рака предстательной железы по методу Глисона. Оценка степени злокачественности по методу Кларку.

В настоящее время ПАО КБ-122 находится в постоянном развитии по дальнейшему совершенствованию различных форм патоморфологической диагностики.

Весь онкологический материал хранится в формалиновом архиве. Кассеты с парафиновыми блоками (кусочки ткани залитые в парафин) и микропрепараты хранятся в архиве. Микропрепараты раскладываются по № и хранятся в специальных стеллажах для хранения микропрепаратов.

При повседневной работе патологоанатомического отделения используются журналы:

1 Регистрационный журнал операционного и биопсийного материала-

регистрируется весь материал доставляемый в лабораторию.

2 Журнал регистрации срочных биопсий — регистрируются все срочные биопсии, поступающие из оперблока.

3 Журнал регистрации цитологического материала поступающего в лабораторию

4 Журнал регистрации операционного и биопсийного материала поступающего на иммуногистохимические исследования

5 Журнал регистрации выдачи микропрепаратов и блоков из архива по запросам в другие лечебные учреждения. (Учетная форма ЦПАЛ ГУ)

6 Журнал регистрации секционных случаев. Регистрируются все секционные случаи, исследуемые в лаборатории.

7 Журнал выдачи бланков « Медицинских свидетельств о смерти»

8 Журнал регистрации умерших в КБ-122. Регистрируются все умершие в стационаре КБ-122.

9 Журнал учета расхода этилового спирта.

Утилизация отходов

Одним из важнейших моментов в работе патологоанатомического отделения является утилизация биологического материала и химических отходов.

Отработанный биологический материал пакуется в полиэтиленовые пакеты желтого цвета и хранится в контейнерах, в холодильной камере. Затем, согласно договору между КБ-122 и ритуальной компанией, контейнеры вывозятся на кремацию транспортом ритуальной компании.

Основные химические отходы: формалин, ксилол, изопропиловый спирт – сливаются в специальные канистры и утилизируются по договору с полигоном « Красный Бор».

Механическое удерживание земляных масс: Механическое удерживание земляных масс на склоне обеспечивают контрфорсными сооружениями различных конструкций.

Общие условия выбора системы дренажа: Система дренажа выбирается в зависимости от характера защищаемого.

Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ — конструкции, предназначен­ные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой.

источник

Возбудитель – микроорганизмы рода mycobacterium (mycos – гриб, bacterium- палочка), включает в себя много видов (49), как патогенных, так и непатогенных. К патогенным относятся микобактерии, вызывающие туберкулез у людей (myc.tuberculosis), животных (myc.bovis), птиц (myc.avium-intracellulare), мышей (myc. мurium).

Наряду с истинными возбудителями от животных и человека, с объектов внешней среды выделяют так называемые атипичные, неклассифицированные, анонимные микобактерии, отличающиеся по своим свойствам от туберкулезных и друг от друга.

Туберкулез – инфекционная, хронически протекающая болезнь человека, животных, в том числе птиц, особенно кур. Патологоанатомически он характеризуется образованием туберкул (бугорков) и творожисто-перерожденных туберкулезных очагов. Возбудителей туберкулеза человека и крупного рогатого скота открыл Р.Кох в 1882 г. Птичий вид установил Штраус и Гамалея (1891).

Морфология. Микобактерии туберкулеза – кислото-, спирто- и щелочеустойчивые микроорганизмы, неподвижны, спор и капсул не образуют, жгутиков не имеют. Их типичная форма – стройные или слегка изогнутые палочки с закругленными краями. В электронном микроскопе микобактерии всех видов имеют вид палочки с закругленными краями. Однако встречаются нередко изогнутые и овальные формы. Размеры клеток одной и той же культуры могут значительно варьировать – длина от 1,5 до 4 мкм, ширина от 0,2 до 0,5 мкм. Особенно это заметно в культурах разных возрастов. Установлена филогенетическая близость туберкулезных микобактерий с лучистыми грибами-актиномицетами. Это сходство проявляется в медленном развитии микобактерии на элективных питательных средах, а также в способе размножения, полиморфности и способности при определенных условиях иногда образовывать нитевидные ветвистые формы с колбовидными вздутиями на концах, что напоминает актиномицеты. Это и явилось причиной замены названия бациллы Коха микобактерией туберкулеза (myc.tuberculosis).

Микобактерии характеризуются высоким содержанием липидов (от 30,6 до 38,9%), вследствие этого медленно воспринимают анилиновые красители. Окрашивание их достигается применением концетрированного карболового фуксина при подогревании. При таком способе окраски микобактерии туберкулеза хорошо удерживают его и не обесцвечиваются при воздействии разведенных кислот, щелочей и спирта, чем они и отличаются от других микробов. На этом основан метод окраски и дифференциации микобактерий по Цилю-Нильсену.

Микобактерии с трудом окрашиваются по Граму и приобретают темно-фиолетовый цвет.

В культурах, выделенных от крупного рогатого скота, чаще находят шаровидные образования правильной формы, одних размеров, а также отдельно лежащие нитевидные структуры.

Культивирование.Микобактерии туберкулеза способны размножаться в строго аэробных условиях на соответствующих элективных питательных средах, содержащих в определенных соединениях углерод, азот, водород и кислород. Из минеральных веществ жизненно необходимыми оказались магний, калий, сера и фосфор. Стимулирующее влияние на рост туберкулезных микобактерий оказывают соли железа и некоторые другие элементы. Для осуществления биохимических процессов у микобактерий необходимым условием является оптимальная температура: 37-38 0 С для человеческого, 38-39 0 С для бычьего и 39-41 0 С для птичьего вида. Следует отметить, что микобактериям туберкулеза присущ медленный обмен веществ, а следовательно они характеризуются замедленным ростом культур на средах. Рост их проявляется через 7-30 дней и более.

При выборе среды следует учитывать ее назначение: для пересева и сохранения субкультур лучше пользоваться простыми глицеринсодержащими средами (МПГБ, глицериновый картофель). Для первичного выделения культур оправдали себя только плотные яичные среды (Петраньяни, Гельберга и др.). Для работы по изучению биохимии микобактерий и других целей целесообразно пользоваться безбелковыми синтетическими средами (Сотона, Моделя).

На плотных средах микобактерии растут в виде колоний, которые могут быть гладкими (S-форма) или бородавчатыми (R-форма), мелкими либо крупными, блестящими или матовыми, в виде изолированных колоний или в виде сплошного налета, в виде белого или белого с желтым оттенком, или же другого цвета.

Биохимические свойства. Микобактерии туберкулеза содержат различные ферменты. Ферменты эстеразы и липазы расщепляют жиры, что дает возможность микобактериям использовать их в качестве питательного материала. Дегидразы расщепляют органические кислоты, в том числе аминокислоты. Уреазы расщепляют мочевину, перигалоза – углеводы, каталаза – перекись водорода.

Протеолитические ферменты (протеазы) расщепляют белок. Микобактерии ферментируют алкоголь, глицерин и многочисленные углеводы, лецитин, фосфатиды. У молодых микобактерий туберкулеза сильно выражены редуцирующие свойства, что, в частности, проявляется в их способности восстанавливать теллурит.

микобактерий туберкулеза обладают значительной устойчивостью к химическим и физическим воздействиям, особенно к высушиванию. В высушенной мокроте, кусочках пораженной ткани, пыли микобактерии жизнестойки от 2 до 7 месяцев и более. В воде микроб выживает 5 мес., в почве – 7 мес., при гниении материала – 76-167 дней и дольше. Холод не влияет на жизнеспособность микобактерий.

Микобактерии весьма чувствительны к воздействию прямых солнечных лучей, в жаркие дни в мокроте они погибают через 1,5-2 ч. Особенно губительны для микобактерии ультрафиолетовые лучи. Большое значение в санитарно-профилактическом отношении имеет высокая чувствительность микобактерии к нагреванию. Во влажной среде микобактерии гибнут при 60 0 С в течение 1 ч, при 65 0 С – через 15 мин, при 70-80 0 С – через 5-10 мин. В свежем молоке возбудитель туберкулеза сохраняется в течение 9-10 дней, в скисшем молоке – гибнет под воздействием молочной кислоты. В масле микобактерии сохраняются неделями, а в некоторых сырах – даже месяцами. микобактерий туберкулеза по сравнению с другими неспорообразующими бактериями значительно более устойчивы к химическим дезинфицирующим веществам, 5%-ный раствор фенола и 10%-ный раствор лизола разрушают возбудителя по истечении 24 ч, 4%-ный формалин – после 12 ч.

Из дезинфицирующих растворов при туберкулезе рекомендуют: 15%-ный раствор смеси, приготовленной из равных частей сернокарболовой кислоты и 16%-ного раствора гидроокиси натрия, время воздействия до 4 ч; 3%-ный щелочной раствор формальдегида при 3-кратном нанесении на объект и 3-часовой экспозиции; хлорную известь в виде порошка, растворов и взвесей, содержащих не менее 5 % активного хлора при экспозиции не менее 3 ч; 3-5%-ный раствор хлорамина Б, гипохлор, 1%-ный раствор глутарового альдегида, 8,5%-ную эмульсию феносмолина из расчета 1л/м 2 и при экспозиции 3 ч и др.

Патогенность.Микобактерии бычьего вида патогенны для многих животных (коровы, овцы, козы, свиньи, лошади, кошки, собаки, олени, маралы и др). Из лабораторных животных наиболее чувствительны кролики и морские свинки, у которых развивается генерализованный туберкулез.

Птичий вид микобактерий вызывает туберкулез у кур, индеек, цесарок, фазанов, павлинов, голубей, уток и др. В естественных условиях птичьими микобактериями заражаются домашние животные (лошади, свиньи, козы, овцы, иногда крупный рогатый скот), а в некоторых случаях и человек.

Инкубационный период длится от нескольких недель до нескольких лет. Доказана персистенция L–форм в организме, которые обладают способностью к реверсии в типичные микобактерии. Наличие L–форм рассматривают как причину рецидива туберкулеза в оздоровленных стадах (В.С.Федосеев, А.Н.Байгазанов, 1987).

Лабораторная диагностика.Выделить возбудителя туберкулеза в чистом виде трудно. Успех во многом зависит от характера исследуемого материала. В качестве последнего можно использовать пораженные органы и ткани, гной, молоко, масло, творог, мочу, фекалии, навоз, почву, воду, соскобы с различных объектов животноводческих помещений и т.п. В каждом случае перед посевом необходимо выбирать соответствующий метод обработки исследуемого материала.

Для освобождения от посторонней микрофлоры исследуемый материал (молоко, мочу, слизь, пораженные органы и ткани) обрабатывают 6-10%-ным раствором серной кислоты (метод Гона). Общее воздействие раствора серной кислоты на материал не должно превышать 25-30 мин.

Для обработки жидкого, полужидкого материала и соскобов с объектов среды обитания животных используют метод флотации. Сущность метода заключается в том, что исследуемый материал взбалтывают в колбе с углеводородами (бензол, бензин и др.) и всплывающий слой пены, то есть флотат, содержащий микобактерии туберкулеза, используют для приготовления мазков, посевов на питательные среды, заражения лабораторных животных.

При убое животных, положительно реагирующих на туберкулин, и отсутствии патологоанатомических изменений в лимфатических узлах, тканях и органах туберкулезного характера, туши выпускают без ограничений, шкуры – без дезинфекции.

Молоко от коров неблагополучных по туберкулезу, обезвреживают в хозяйстве при 90 0 С в течение 5 мин или при 85 0 С в течение 30 мин, после чего отправляют на молокозавод, где его подвергают повторной пастеризации при обычном режиме. Запрещается продажа молока и молочных продуктов на рынке из неблагополучных по туберкулезу хозяйств и от клинически больных и положительно реагирующих на туберкулез животных частного сектора.

Полностью туша и все другие продукты убоя направляются на утилизацию в двух случаях: первый – когда туши имеют тощую упитанность, любую форму поражения туберкулезом органов или лимфатических узлов, второй — при обнаружении генерализованного туберкулезного процесса независимо от упитанности.

Аллергическая диагностика туберкулеза. В практике ведущее значение для прижизненного распознавания туберкулеза у животных и птиц имеет аллергическая диагностика при помощи туберкулина (Р.Кох, 1890). Следует указать, что еще до сообщения Коха в России Гельман в 1888-1889 гг. изготовил экстракт из туберкулезных бактерий и испытал его с диагностической целью на больных туберкулезом коровах, получив при этом положительный результат. Диагностика с помощью туберкулина завоевала прочное положение в медицине и ветеринарии. В настоящее время основным методом проверки животных на туберкулез является внутрикожная туберкулиновая проба. Для изготовления туберкулинов для млекопитающих используют штаммы только одного бычьего вида. Применяют сухой очищенный туберкулин (протеин-пурифиед-дериват – ППД).

Иммунитет и средства специфической профилактики. При туберкулезе он нестерильный, длящийся до тех пор, пока в организме находятся живые микобактерии туберкулеза.

Вакцину против туберкулеза предложили в 1924 г. французские ученые Кальметт и Герен.

В ветеринарной практике вакцину БЦЖ применяют в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах в соответствии с наставлением, утвержденным в 1985 г. (М.А.Сафин).

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник

Туберкулез, воздушно-капельные инфекции.

Возбудитель туберкулеза открыт в 1882 году Робертом Кохом. Представляет собой тонкие палочки, Гр(+), спол и капсул не образует, не подвижен. В составе клеточной стенки имеется до 40-50% восков, липидов, стеаринов, жирных кислот. Необычное строение клеточной стенки определяет ряд биологических особенностей-

Устойчивость к кислотам и щелочам

Устойчивость к действию анилиновых красителей

Устойчивость к высушиванию и УФ(гидрофобность)

Устойчивость к обычным концентрациям дез. Веществ.

С содержанием этих компонентов клеточной стенки связаны патогенные и токсические свойства микобактерий.

Различают 4 вида возбудителя –

Микобактериум туберкулезис. Встречается у человека в 93-95% случаев. Европейская статистика.

Микобактериум бовис(бычий вариант) – 3-6% случаев заболеваемости(кишечная форма)

Авиум(птичий) – не актуальны в патологии человека

Африкус — не актуальны в патологии человека

В антигеном плане все эти виды однородны, поэтому все биологические свойства рассматриваем на примере микобакетриум туберкулезис.

Резистентность.Сохраняется в проточной воде более года, в почве до 6 месяцев, в мокроте до 2х месяцев, в желудочном соке до 6 часов. Погибают при температуре 100-120 градусов и при воздействии повышенных концентраций дез. Веществ.

Эпидемиология. Заболевание можно назвать антропонозным, если не учитывать бычий вариант. Возбудитель живет в организме человека. Источник заболевания – человек. Заражение происзодит чаще всего аэрогенным механизмом. Воздушно-капельный, воздушно-пылевой. Возбудитель аэроб и наиболее частая локализация – верхушка легких – наиболее аэрогенный участок. Помимо этого существует алиментарный(фекально-оральный) механизм, взывает кишечную форму и гематогенную.

Иммунитет при туберкулезе. 3 основных классификационных особенности

Врожденный видовой(рецепторов к организму человека нет. Человек болеть не должен. Это связано с химическим строением микроорганизма.)

Нестреильный(инфекционный-иммунитет только пока есть возбудитель)

Для возникновения заболевания необходимы условия

Длительный контакт с источником(носителем)

Временное снижение резистентности организма человека

Локализация — туберкулез может поражать любые органы и ткани – туберкулез легких, туберкулезное поражение печени, туберкулезный плеврит, туберкулез кишечника, туберкулез костей и суставов, почек, моче-половых органов, кожи и подкожной клетчатки, серозных оболочек. Практически все органы могут поражаться. Рецепторов как таковых нет, где есть, там и возникает.

В место локализации возбудителя при наличии ГЗД(гиперчуствительность замедленного типа) происходит миграция клеток лимфоидно-макрофагальной системы(лимфоциты, киллеры, эффекторы, макрофаги, фагоциты)

Они образуют вокруг этого участка клеточно-лейкоцитарный вал(инфильтрат), который способствует ограничению распространения возбудителя и дальнейшей его инактивации. Этот вал образуется для уничтожения возбудителя. Имунокомпетентные клетки выделяют группу цитотоксических факторов, запускают механизм воспаления(БАВ) и затем все инактивированные остатки клеток фагоцитируются и выводятся из организма. Это происходит в 80% благоприятных исходах течения этого заболевания. При неблагоприятном течении процесса – комплекс цитотоксинов, факторов воспаления, и токсических продуктов метаболизма самих бактерий и токсических компонентов клеточной стенки, вызывает некроз в толще инфильтрата.(козиоидный некроз). Протекает как злокачественная опухоль(повреждаются мелкие сосуды, крупные сосуды. Человек умирает от кровотечения).

Эпидемиология.Лица находящиеся в местах лишения свободы. Там в 50 раз заболеваемость выше.

Бактериоскопический — окраска по Цель-Нильсону(окрашивают концетрированным фуксином- все красное, далее обрабатываем кислотой, все обезвечивается, микобактерии нет, дальше окрашиваем все остальное) и имунофлюорестцентный метод(см. методичку). Материал чаще всего мокрота. Ее обогащают.

Бактериологический. Основной. Культивируют на специальных питательных средах-Левинштейн-Йенсона(элективная среда) и среда Сотона. В состав входит яичный порошок, глицерин, картофельная мука и другие компоненты для сложного метаболизма микобактерий, т.к. необычное строение клеток. Рост возбудителя наблюдается к концу второй-третьей недели, а характерные колонии образуются к концу месяца.

Желтовато-коричневого цвета, сухие, крошащиеся, Р типа. У них неровная поверхность, край, бугристые, типичны. Растут долго из за особого химического состава. Дальнейшая идентификация не требуется.

Микобактерии из мокроты будут выделятся уже при некрозе(последние стадии)

Увеличение лимфатических узлов.

Существует серологическая диагностика, биологический метод. Серологическая – РСКА, РНГА, антитела образуются, но защитной роли не выполняют. Биологический – заражение кроликов.

Аллергический. Проба манту. Введение внтурикожно в кожу предплечья препарата туберкулина. Туберкулин – это фильтрат бульонной культуры, микобактерий, убитых нагреванием. Генно-инженерный туберкулин. Он дает только положительные и отрицательные реакции. Результаты манту могут быть «–» , «+» и резко «+» проба.

Отрицательная реакция – через 72 часа – отсутствие подкожных следов. У взрослых и детей вводится разная концентрация. Вираж – разница в размерах манту в разные года. Резкоположительная проба – больше 1,5-2 см. Она говорит об активно протекающем туберкулезном процессе. Отрицательная проба манту может быть у пожилых или у людей с ослабленных иммунитетом, когда активно протекающий процесс истощает все ресурсы организма.

Профилактика – в качестве профилактики используется вакцинаБЦЖ.Сохраняется после вакцинации 4-5 лет, в виде очагов или инфильтрата. Вакцинация проводят в род доме, или в первые месяцы.

Ревакцинация с учетом показаний в 7 лет, перед школой.

Лечение. 2 группы терапевтических препаратов – производные аминосалициловой кислоты(тубазид, изомиозид и тд.), противотуберкулезные антибиотики – циклосерин, каномецин, римфамицин, клептомицин.

Комплекс физиотерапии, санаторно-курортное лечение.

Микобактерии — кислотоустойчивые неподвижные грамположительные палочковидные (прямые или изогнутые) бактерии, способные образовывать нитевидные и мицелиальные структуры. Для них характерно высокое содержание липидов и восков в клеточных стенках, что обеспечивает устойчивость к спиртам, кислотам, щелочам, дезинфицирующим средствам, высушиванию и действию солнечных лучей, плохую окрашиваемость красителями, высокую гидрофобность, патогенность.

Наряду с кислотоустойчивостью, важной характеристикой микобактерий являетсямедленный ростна питательных средах, особенно микобактерий туберкулеза. Еще одна особенность микобактерий — образование пигментов, часть видов образует пигмент в темноте.

Род микобактерий может насчитывать до 200 паразитических и сапрофитических видов, из них хорошо изучено и идентифицировано около 30 видов. Микобактерии широко распространены в почве и воде, их выявляют у широкого круга тепло- и холоднокровных животных.

Среди патогенных микобактерий наибольшее значение имеют основной возбудитель туберкулеза человека — M.tuberculosis(палочка Коха),M.bovis- возбудитель туберкулеза крупного рогатого скота иM.leprae- возбудитель проказы (лепры). Заболевания у людей могут вызывать такжеM.avium- возбудитель туберкулеза птиц и около 20 других потенциально патогенных видов, способных вызывать у человека атипичные формы поражений (микобактериозы).

Морфологические свойстватипичны для микобактерий. Это тонкие прямые или слегка изогнутые палочки с зернистыми образованиями в цитоплазме, могут встречаться кокковидные структуры,L- формы. Кислотоустойчивы (высокое содержание липидов и миколовой кислоты в клеточной стенке). Имеют кислотолабильные гранулы (зерна Муха) в цитоплазме. Грамположительны, плохо красятся анилиновыми красителями, поЦилю — Нильсенуони окрашиваются в ярко — красный цвет.

Культуральные свойства.Растут в аэробных и факультативно — анаэробных условиях. Растут очень медленно — в течении нескольких недель. Микобактерии нуждаются в белке и глицерине, факторах роста. Наиболее часто используют плотные яичные среды Левенштайна — Йенсена, ФиннаII, синтетические и полусинтетические жидкие среды.

На плотных средах рост отмечается на 15-40 сутки в виде сухого морщинистого налета кремового цвета (R- формы), колонии по виду напоминают цветную капусту. На жидких средах отмечается рост в виде поверхностной пленки.

Палочка Коха устойчива во внешней среде, в высохших биосубстратах сохраняется до нескольких недель.

Факторы патогенности.Патогенные свойства туберкулезной палочки и биологические реакции, которыми отвечает макроорганизм на внедрение возбудителя, связано с особенностями его химического состава, высоким содержанием липидов и их составом (наличие жирных кислот —фтиоидной, миколовой, туберкулостеариновойи др., фосфатидов и других фракций).

Главный фактор — токсичный гликолипид — “корд — фактор”, легко выявляемый при культивировании на жидких средах. Он обеспечивает сближенное расположение микобактерий в виде кос, жгута, корда. Корд — фактор оказывает токсическое действие на ткани, а также блокирует окислительное фосфорилирование в митохондриях макрофагов (защищает от фагоцитоза). С химическим составом микобактерий связаны еще две их важнейшие характеристики:

незавершенный фагоцитозэтого внутриклеточного паразита (механизмы — блокада фагосомо — лизосомального слияния, устойчивость к действию лизосомальных ферментов);

способность вызывать выраженнуюреакцию ГЗТ, выявляемую с помощью туберкулиновой пробы — “ГЗТ туберкулинового типа”.

Антигенная структура.Микобактерии туберкулеза имеют сложный и мозаичный набор антигенов. В антигенном отношенииM.tuberculosisимеет наибольшее сходство сM.bovisиM.microti. Имеются перекрестно — реагирующие антигены с коринебактериями, актимомицетами. Для идентификации микобактерий антигенные свойства практически не используют.

Эпидемиология.Основными путями заражения являются воздушно — капельный и воздушно — пылевой. Основным источником заражения является больной туберкулезом человек. Особую роль имеет скученность проживания, в России наибольшую значимость имеют места заключения, лагеря беженцев, лица без определенного места жительства и другиен социально ущербные группы населения. В относительно небольшом проценте случаев туберкулез обусловлен заражением от животных (чаще — через молоко) М.bovis.

В течение жизни человек неоднократно контактирует с микобактериями туберкулеза, однако туберкулезный патологический процесс развивается далеко не у всех инфицированнных. Это зависит от многих факторов и прежде всего — резистентности организма.

Наиболее часто заражение происходит через дыхательные пути. Попавшие в организм микобактерии захватываются альвеолярными и легочными макрофагами. В месте попадания может развиться первичный аффект (бронхопневмонический фокус).Далее возбудитель транспортируется в регионарные лимфоузлы, вызывая воспалительную реакцию — лимфангоит и лимфаденит. Первичный аффект, лимфангоит и лимфаденит —первичный комплекс (первичный очаг туберкулеза), характеризующийся образованием по ходу лимфатических путей и узлов гранулем в виде бугорков (бугорчатка или туберкулез).

Образование гранулем представляет собой клеточную реакцию ГЗТ на ряд химических компонентов микобактерий. В центре гранулемы в очаге некроза (казеозного распада) находятся микобактерии. Очаг окружен гигантскими многоядерными клетками Пирогова — Лангханса, их окружают эпителиоидные клетки а по периферии — лимфоциты, плазматические и мононуклеарные клетки.

при достаточной резистентностиорганизма размножение возбудителя в гранулемах прекращается, очаг окружается соединительнотканной капсулой и обезизвествляется (откладываются соли кальция). Этот процесс определяется формированиемнестерильного инфекционного иммунитетак возбудителю туберкулеза. Нестерильность — способность микобактерий длительно сохраняться в первичном очаге и ждать свой час (иногда через несколько десятилетий);

при недостаточной резистентности— усиленный казеозный распад очага, казеозная пневмония, тяжелая первичная легочная чахотка и генерализованный туберкулез (диссеминированный или милиарный туберкулез с гранулемами в различных органах).

Вторичный туберкулез.Вторичный туберкулезный процесс — реактивация возбудителя в результате ослабления резистентности наблюдается при стрессах, нарушениях питания и у лиц пожилого возраста. Возникают очаги казеозного распада в легких с образованием полостей, поражение бронхов, мелких кровеносных сосудов.

Иммунитет.В основе нестерильного инфекционного и вакцинального иммунитета при туберкулезе — клеточный иммунитет в виде гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), опосредуемой Т- лимфоцитами и макрофагами. Т- лимфоциты при участии белков главной системы гистосовместимости классаIраспознают клетки, инфицированные микобактериями туберкулеза, атакуют и разрушают их. Антибактериальные антитела связываются с различными антигенами возбудителя, образуют циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) и способствуют их удалению из организма.

Аллергическая перестройка (ГЗТ) к туберкулезной палочке свидетельствует о формировании приобретенного иммунитета и может быть выявлена с помощью туберкулиновой пробы. Эта проба является достаточно специфичной. Старый туберкулин Коха представляет концентрированный фильтрат стерилизованных компонентов микобактерий. Очищенный препарат PPD(новый туберкулин Коха, содержащий туберкулопротеины) используют преимущественно для постановкивнутрикожной пробы Манту. С помощью этой пробы проводят отбор лиц, подлежащих ревакцинации. Положительный результат пробы Манту нельзя рассматривать как обязательный признак активного процесса (это на самом деле показатель ГЗТ), а отрицательный — не всегда свидетельствует об его отсутствии (анергия, иммунодефициты).

Иммунопрофилактикавключает внутрикожное введение аттенуированного штаммаB.bovis, известного как бацилла Кальметта — Жерена (БЦЖ). В России вакцинацию проводят новорожденным (на 5-7 дни жизни), ревакцинацию — в 7-12-17-22 лет и более старших возрастах при отрицательной пробе Манту (т.е. отсутствии клеточного нестерильного = вакцинального или инфекционного иммунитета — ГЗТ).

Лабораторная диагностика.Применяют микроскопические, бактериологические, биологические, аллергологические, серологические и молекулярно — генетические методы.

Микроскопическая диагностикавключает микроскопию нативного материала, использование методов накопления, люминесцентную диагностику.Микроскопия нативного патологического материала(мокрота, отделяемое свищей, промывные воды из бронхов, моча) в мазках, окрашенных по Цилю — Нильсену, позволяет выявлять красные кислотоустойчивые палочки при концентрации микобактерий не менее нескольких сот тысяч / мл.Методы накопления(например, флотации) повышают чувствительность микроскопии до нескольких тысяч микробных тел / мл.Люминесцентная микроскопияс использованием акридинового оранжевого или аурамина — родамина — наиболее чувствительный и эффективный метод бактериоскопии, чувствительность — 500-1000 микобактерий / мл. Позволяет выявлять микобактерии с измененными культуральными и тинкт. свойствами.

Бактериологический метод(посев на питательные среды) позволяет обнаружить микобактерии при концентрации 200-300 / мл. Наиболее эффективен до или в начале лечения, в конце лечения уступает по эффективности люминесцентному методу. Недостаток — длительность получения результатов — от 2 до 12 недель. Достоинство — возможность оценки вирулентности культуры, определение чувствительности к лекарственным препаратам. Разработаны ускоренные методы выделения. По методу Прайса материал помещают на предметное стекло, обрабатывают серной кислотой, отмывают физиологическим раствором и вносят в питательную среду с цитратной кровью. Стекло вынимают через 3-4 суток и окрашивают по Цилю — Нильсену.

Золотой стандарт — биологическая проба на морских свинках, позволяет определять до 10 микобактерий в мл. Распространение резистентных и измененных микобактерий снизило чувствительность метода. Метод требует соблюдения режимных условий и применяется в крупных специализированных лабораториях.

Аллергологические методы— это широко используемые кожные пробы с туберкулином и методы аллергодиагностикиinvitro(РТМЛ, ППН — показатель повреждения нейтрофилов и др.).

Серологические методымногочисленны (РСК, РА, РПГА), однако в связи с недостаточной специфичностью используют мало.

Наиболее совершенны ген. методы, в практических лабораториях их используют пока недостаточно.

Среди методов идентификации микобактерийнаибольшую практическую ценность имеют два подхода:

— методы дифференциации M.tuberculosisиM.bovisот прочих микобактерий;

— методы дифференциации M.tuberculosisиM.bovis.

Существует ряд методов дифференциации микобактерий двух основных видов от остальных. Из них наиболее простым и доступным является оценка роста на яичной среде, содержащей салициловый натрий в концентрациях 0,5 и 1,0 мг/мл. На этих средах, в отличии от других микобактерий, M.tuberculosisиM.bovisне растут.

Для дифференциации M.tuberculosisот всех других видов микобактерий , в том числе отM.bovis, используютниациновый тест (определение синтезируемойM.tuberculosisв больших количествах никотиновой кислоты, выявляемой с помощью цианистых или роданистых соединений по ярко- желтому окрашиванию). У микобактерий туберкулеза также отмечается положительный тест восстановления нитратов. Учитывают скорость роста и характер пигментообразования. Используют цитохимические методы, позволяющие выявлять корд — фактор (вирулентность) по прочности связи красителей — нейтрального красного или нильского голубого при обработке щелочью.

Этот вид микобактерий выявлен у 60 видов млекопитающих. Эпидемическую опасность для человека представляют крупный рогатый скот, реже — верблюды, козы, овцы, свиньи, собаки, кошки. Больные животные выделяют микобактерии с молоком, мокротой, экскрементами. Человек заражается при уходе за больными животными или употреблении сырого молока и молочных продуктов (в сыре и масле возбудитель может сохраняться более 200 дней). На долю этого возбудителя приходится до 5% случаев туберкулеза (высокая доля туберкулеза бычьего типа — в Якутии и других территориях с высоким уровнем заболеваемости животных туберкулезом).

1. Возбудитель туберкулеза — микобактерия, относится к семей­ству Micobacteriaceae. Различают туберкулезные микобактерии человеческого, бычьего и птичьего типов. Для человека они па­тогенны. Помимо патогенных для человека, в природе широко распространенысапрофитные микобактерии, или так называе­мыепаратуберкулезные бациллы. Они содержатся в водопро­водной и сточной воде, в молоке и масле, на овощах и ягодах. Их обнаруживают на коже, в промывных водах желудка и глотки, они выделяются со слюной, мокротой, калом и мочой.

Морфологически они напоминают патогенные микобактерии, характеризуются кислотоустойчивостью. По этой причине воз­можны ошибки при распознавании природы микобактерии, а следовательно, и характера патологического процесса. Парату-беркулезные бациллы, в отличие от патогенных, не вызывают типичных изменений в организме людей и животных. Принад­лежность их к тому или другому виду устанавливается главнымобразом на основании их культуралъных свойств и результатов прививки морским свинкам.

Микобактерии туберкулеза (МБТ) были открыты Р. Кохом в мокроте больного туберкулезом. Человеческий тип туберкулез­ного возбудителя: палочки прямые или изогнутые длиной 1,5— 4 м толщиной 0,3—0,5 м. Величина палочек зависит от возраста микроба и условий его обитания. В тканях живого организма палочки могут удлиняться, что, по-видимому, зависит от за­медленного их деления. В казеозных массах палочки располага­ются неровными кучами по 2—3 и более. В различных условиях пребывания в организме палочки могут образовать нитевид­ные, ветвящиеся формы с булавовидными образованиями на концах нитей.Полиморфизм является характерным свойством микобактерии. Кислотоупорные МБТ обладают свойством медленно воспринимать анилиновые красители. Поэтому их окраска производится с применением протравы (карболоваякислота). При подогревании наиболее распространенные способы окраски следующие:

При этих окрасках в палочках отмечаются более яркие крас­ные или фиолетовые гранулы. Исследование в электронном микроскопе позволило установить сложное строение их стенки из 3 слоев, а также наличие в цитоплазме ядра и гранул. В пре­паратах из культур, особенно на жидких средах, вирулентные МБТ располагаются в виде жгутов. В препаратах почти всегда имеются разной степени окраски округлые тельца (зерна). Это вегетативные формы, которые получаются в результате раз­множения микроба поперечным делением, и формы развития из зерен. Некоторыми учеными было доказано существование некислотоустойчивых культур МБТ, которые названыL-фор-мами. Эти формы способны расти на обычных средах и пре­вращаться в бактерии.L-формы представляются ввиде телец с венцолъю, внутри которого 1 или 2 тельца. Эта пребациллярная некислотоустойчивая стадия являетсянормальной стадией мик­роба. Фильтрующиеся формы, зерна, кокки и палочки представ­ляют формы закономерно протекающих стадий развития воз­будителя. В частности, полагают, что зернистые формы, среди которых могут быть мелкие фильтрующие элементы, представ­ляютнеклеточную стадию, а кокковые формы и палочки, вы­растающие из кокков, —клеточную стадию развития микроба.

Микобактерии туберкулеза вне организма растут в чистых культурах на плотных и жидких средах, с хорошим доступом воздуха; однако они могут развиваться и в относительно ана­эробных условиях, но очень медленно, скудно. На жидких специальных питательных средах МБТ растут на поверхности среды в виде морщинистой пленки. МБТ растут на питатель­ных средах, содержащих минеральные соли, аминокислоты, углеводы, яичный белок и желток и особенноглицерин Могут расти (более скудно) в средах из минеральных солей, особенно аммония. Оптимальная температура для роста 37—38 °С. На плотных питательных средах МБТ растут в виде светло-кремового морщинистого или чешуйчатого суховатого налета, запах культур ароматический, очень характерный, очень редко микобактерии человеческого типа могут давать гладкие коло­нии. Культуры МБТ не всегда бывают типичны (особенно при антибактериальной терапии больных); они могут быть не­сколько влажными, содержать отдельные гладкие или пигмен­тированные колонии. Туберкулезную природу выделенных не­типичных культур устанавливают «мышиной пробой» (1 или 0,1 мг вводят в вену хвоста 2 белым мышам, смерть наступает приявлениях генерализованного туберкулеза через 2—4 мес) наряду с пробой патогенности на морских свинках.

МБТ экзотоксина не выделяют. Однако фильтраты их культур на жидких питательных средах токсичны для животных, боль­ных туберкулезом, что связанно с выделением в среду эндо­токсина. МБТ выделяют также летучие токсины. Особенно­стью этих токсических веществ является их специфическое действие только на инфицированных и больных туберкулезом людей и животных.

2. Благодаря особому химическому строению микобактерии туберку­леза обладают значительной устойчивостью к физическим и хи­мическим агентам. Во влажной мокроте микобактерии выдер­живают нагревание в течение 30 мин при 75 «С, при кипячении погибают через 5 мин. В выделенной мокроте МВТ погибают при 100 °С через 45 мин. В мокроте, выделенной и сохраняе­мой в темноте при комнатой температуре, жизнеспособность палочек сохраняется не менее 4 мес, в рассеянном свете они погибают через 1—1,5 мес. В суховоздушной камере при ув­лажнении с температурой 80 °С МВТ выживают в течение 2 ч. В уличной пыли МВТ сохраняются до 10 дней, на страницах книг до 3 мес. В воде палочки выживают не менее 150 дней после заражения. МВТ выдерживают процессы гниения и мо­гут несколько месяцев сохраняться в погребенных трупах. Препараты хлора и йода хорошо действуют на микобактерии.

Лекарственно устойчивые или резистентные микобактерии по­являются у больных при антибактериальной химиотерапии, а иногда возникают и спонтанно (первичная устойчивость).

При испытании на лекарственную устойчивость следует поль­зоваться плотными питательными средами Гельберга, Петрань-яни, Герольда и жидкими — синтетической средойСотона (с плазмой),кровяной средой илиплазмой.

Вопрос 49. Лабораторная диагностика туберкулеза

1. Лабораторная диагностика туберкулеза используется для уста­новления специфической этиологии заболевания, подозрительного на туберкулез. Производят микробиологическое исследование материала от больных.

пунктатов лимфатических узлов.

Исследование на возбудителя туберкулеза производят непо­средственно в доставленном материале бактериоскопическими, а кроме того, бактериологическими и биологическими метода­ми. При необходимости исследовать свежую мокроту делают мазки препарата на предметных стеклах, высушивают на воз­духе, фиксируют на пламени горелки. Затем препарат окраши­вают карболовым фуксином, промывают водой и обесцвечи­вают 15—25%-ным раствором серной кислоты, промывают и докрашивают водным раствором метиленового спирта.

После подсыхания препарат подвергают иммерсионной микро­скопии, просматривают 100 полей зрения (практически весь препарат).Туберкулезные микобактерии визуализируются как ярко-красные, тонкие, изящные, в одиночку или группами, большей частью лежащие вне клеток палочки. В настоящее время имеет распространениеметод флотации с последующей микроскопией. Промывные воды желудка бактериоскопически, дальнейшее исследование проводят так же, как и при исследо­вании мокроты.Мазок из гортани или зева окрашиваютпо Ци-лю-Нильсену. Мочу центрифугируют и готовят мазок из осадкамочи. Спинномозговую жидкость, взятую асептично, отстаивают сутки на холоде, после чего образуется тонкаяфибринозная пленка (паутинка), в которой содержатся туберкулезные мико­бактерии. Делают мазок на предметном стекле, высушивают на воздухе, фиксируют, окрашиваютпо Цилю-Нильсену. Если пле­ночка не образовалась, то исследованию подвергают отцен-трифугированный осадок.

источник

Окраска по Цилю-Нильсену – это один из методов, используемый для обнаружения при исследовании анализов больного различных заболеваний. В случае изучения мокроты пациента на предмет наличия возбудителей, к примеру, туберкулеза широко используется данный метод. В этой статье пойдет речь о нюансах его проведения, а также о некоторых аналогичных методах.

Этот метод окрашивания используется в тех случаях, когда необходимо выявить в образце кислотоустойчивые микроорганизмы, к которым относятся возбудители туберкулеза, проказы и микробактериозов. Такие бактерии характеризуются, прежде всего, медленной скоростью роста, общими морфологическими особенностями, а также устойчивостью к кислотам и некоторым другим химическим веществам. Из-за последнего свойства такие бактерии плохо поддаются окраске обычными разведенными красителями. Для окрашивания таких бактерий на препарат наносится и в дальнейшем поджигается фуксин Циля, причем полученная окраска не исчезает под воздействием спирта и кислот.

Для проведения окраски образца по методу Циля-Нильсена необходимы следующие реактивы:

  • Метиленовый синий с 10%-ным содержанием спирта;
  • Раствор солянокислого спирта;
  • Фуксин Циля, состоящий из фенола, фуксина и этилового спирта в количестве 50 г, 10 г и 10 г соответственно.

Также потребуется следующие инструменты:

  • Газовая горелка;
  • Часы для слежения за временем;
  • Вода;
  • 96%-ный этиловый спирт;
  • Перчатки.

Окрашивание по методу Циля-Нильсена состоит из следующих этапов:

  1. На мазок, находящийся на предметном стекле, накладывается фильтровальная бумага, на которую затем наносится небольшое количество фуксина Циля.
  2. Затем предметное стекло нагревается до появления характерного пара. После появления пара стеклу нужно дать остыть. Затем нужно повторить эту процедуру еще 2 раза, а затем дать подогретому мазку остыть.
  3. После этого нужно смыть фуксин с приборного стекла, предварительно убрав бумагу, с помощью дистиллированной воды.
  4. Затем стекло помещается в раствор соляной или серной кислоты до полного обесцвечивания.
  5. Наконец, на обесцвеченный препарат наносится раствор метиленового синего. Стекло промывается дистиллированной водой и высушивается для дальнейшего исследования образца под микроскопом.

Липиды, которые содержатся в клеточной стенке кислотоустойчивых бактерий, хорошо удерживают цвет основного красителя. В некислотоустойчивых бактериях стабильно удерживается цвет как основного красителя, так и дополнительного.

При подозрениях на туберкулез исследуется мокрота больного. Длительный кашель с обильными выделениями является показанием для проведения подобного исследования. Визуально наличие возбудителей туберкулеза в организме может выдать мокрота характерной жидкой, пенистой консистенции и признаками гноя, а также мокрота, смешанная с кровью. Обнаружение возбудителей туберкулеза – рисовидных телец, известных также как линзы Коха, облегчается при использовании методов окраски образца. Таких как вышеописанный метод Циля-Нильсена или метод Грама, суть которого будет описана ниже.

Окраска препарата по методу Грама проводится следующим образом:

  • Сперва препарат обрабатывается раствором Люголя на протяжении минуты;
  • Затем препарат обесцвечивается с использованием спирта;
  • Наконец, препарат промывается с использованием воды и дополнительно окрашивается фуксином.

Классификацию бактерий на грамположительные и на грамотрицательные можно наглядно увидеть при проведении подобной окраски. Первый тип бактерий окрашивается в темно-фиолетовый цвет, тогда как второй тип – в красный цвет. Исходя из такой классификации, можно судить о химическом составе клеточной стенки бактерии и о других ее характерных свойствах.

Анализ мокроты пациента является жизненно необходимым для своевременного выявления заболеваний, затрагивающих дыхательные пути, в том числе и туберкулеза. Окрашивание по методу Циля-Нильсена помогает выявить микроорганизмы и возбудители подобных болезней. В том числе и в случаях, когда речь идет об атипичных бактериях. Тем самым позволяет производить более точную и качественную диагностику подобных болезней.

Если вы сталкивались с подобными заболеваниями, знакомы с техниками исследования анализов больного на предмет наличия в них возбудителей инфекции или же у вас есть вопрос по теме, вы можете оставить свой комментарий.

источник

Понравилась статья? Поделить с друзьями: