Диагностикум бруцеллезный жидкий для ра применение

Вы можете добавить товар в корзину, указав количество

Вид упаковки: картонная коробка

Диагностикум эритроцитарный бруцеллезный антигенный жидкий для РА, суспензия для диагностических целей. Представляет собой взвесь бруцелл штамма Brucella abortus 19 ВА в 12 % растворе натрия хлорида, убитых нагреванием. Может быть применен для реакции агглютинации на стекле — качественное определение и при необходимости для определения титра специфических антител в исследуемой сыворотке — постановкой реакции агглютинации пробирочным методом. Из этой же ампулы готовят контрольные разведения

Серологическая диагностика бруцеллеза у людей с помощью РА объемным (пробирочным) и пластинчатым (на стекле) методами в сыворотках крови людей. Учет проводят визуально, РА оценивают по четырехкрестной системе, реакцию в пробирках оценивают на темном фоне по степени просветления в сравнении с контрольными разведениями диагностикума. Реакцию считают положительной, если наблюдается агглютинация не менее чем на ++, диагностическим является титр сыворотки 1:100 и выше

Суспензия представляет собой взвесь бруцелл штамма B. abortus 19 ВА концентрацией 2х10 10 микробных клеток (м.к.)/мл в 12 % растворе натрия хлорида, убитых нагреванием. Консервант – фенол. Гомогенная взвесь сине-голубого цвета. При хранении на дне образуется осадок сине-голубого цвета, легко разбивающийся при встряхивании, и слегка мутная надосадочная жидкость.
Форма выпуска: в ампулах по 2 мл. 10 ампул в пачке с Инструкцией по применению и ножом ампульным.
Условия хранения: в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре +2. 8°С.
Срок годности – 2 года. Препарат с истекшим сроком годности применению не подлежит.
Зарегистрировано в Росздравнадзор

Вся представленная на сайте информация, касающаяся технических характеристик, наличия на складе, стоимости товаров, носит ознакомительный характер и ни при каких условиях не является публичной офертой, определяемой положением пунктом 2 статьи 437 Гражданского кодекса Российской Федерации. Всю подробную информацию о товарах, их наличии и стоимости Вы можете получить у менеджеров отдела клиентского сервиса.

На данном сайте используются файлы cookie (куки) в целях совершенствования работы сайта и получения аналитической информации. В случае несогласия, просим произвести соответствующие настройки в браузере или покинуть данный сайт. Оставаясь на www.art-medika.com, Вы принимаете нашу политику конфиденциальности. Заполняя форму заявки, Вы подтверждаете свое согласие на обработку персональных данных.

© 2012-2019 Арт-Медика оборудование, реагенты, изделия медицинского назначения для клинической лабораторной диагностики

источник

Препарат представляет собой 5%-ную взвесь формалинизированных танизированных эритроцитов барана, сенсибилизированных ультраозвученным антигеном культуральных бледных трепонем или патогенных бледных трепонем штамма Никольса. Используется для диагностики сифилиса путем определения уровня антитрепонемных антител в сыворотке крови обследуемых людей в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА).

Гемолитическая кроличья сыворотка к эритроцитам барана.

Используется в РСК. Получают путем иммунизации кроликов суспензией эритроцитов барана. Кроликов иммунизируют путем введения им в вену уха 50%-й взвеси отмытых эритроцитов барана. Через 7 дней после последней инъекции получают пробную сыворотку. Если титр сыворотки не ниже 1:1200, то делают кровопускание. Сыворотку прогревают 30 мин при 56С. Для предупреждения бактериального роста в гемолитическую сыворотку добавляют консервант (1% борная кислота)

Единый бруцеллезный диагностикум.

Применяется для определения антител в сыворотках крови больных бруцеллезом людей и животных в реакциях агглютинации Райта и Хеддльсона. Препарат представляет собой взвесь бруцелл в физиологическом растворе, содержащем в 1 мл 10 млрд. микробных тел, убитых 0,5 % формалином или нагреванием с последующим добавлением в качестве консерванта карболовой кислоты.
Штаммы для изготовления диагностикума должны обладать всеми характеризующими бруцеллы свойствами. Выращивание бруцелл производят на обычном мясопептонном агаре с добавлением 1 % глюкозы и 2 % глицерина или на печеночном агаре при температуре 37 °С в течение 48-72 часов. После этого производят смыв бруцелл 0,5 % формалинизированным физиологическим раствором, устанавливают стандарт в 10 млрд. микробных тел в 1 мл. Формалинизированную взвесь — диагностикум ставят в термостат при 37 °С на 48 часов для инактивирования. Препарат разливают в ампулы, контролируют на стерильность, стандарт и агглютинабельность.
Препарат представляет собой белую, слегка желтоватую гомогенную взвесь. Для постановки реакции Райта диагностикум разводят в десять раз (до конечной концентрации в 1 млрд. микробных тел), для реакции агглютинации на стекле — используют цельный (0,03 мл).
Срок годности диагностикума — 1 год.

Бруцеллезные вакцины.

Накожная сухая живая бруцеллезная профилактическая вакцина
представляет собой взвесь живой культуры вакцинного штамма B. abortus в сахарозо-желатиновой среде, высушенную методом сублимационной сушки. Сухая вакцина имеет вид аморфной или кристаллической массы молочно-белого или слегка желтоватого цвета. Вакцину высушивают в вакуумных ампулах емкостью 6-8 мл. Вакцину проверяют на отсутствие бактериальной загрязненности, безвредность и иммуногенность.
Бруцеллезную живую сухую вакцину применяют для вакцинации и ревакцинации людей против бруцеллеза. Вакцинацию проводят накожно однократно. Непосредственно перед прививкой вакцину разводят стерильным физиологическим раствором.

Поливалентная бруцеллезная лечебная вакцина используют для лечения острых и хронических форм бруцеллеза. Этот препарат приготавливается из хорошо проверенных штаммов B. melitensis и B. abortus bovis. Вакцина представляет собой взвесь в физиологическом растворе бруцелл овечьего и коровьего видов, убитых нагреванием при 60 °С в течение 1 часа. Контролируется вакцина на стерильность, чистоту и стандарт, а маточная взвесь — на токсичность и специфическую безвредность.

17. Группы риска по бруцеллезу. Определение восприимчивых и невосприимчивых лицЧабаны, пастухи, ветеринарные работники, рабочие мясокомбинатов и консервных заводов, шерстеперерабатывающих предприятий составляют группу риска.

18. Проба Бюрне, компоненты, постановка, учет результатов.

Используют для выявления состояния ГЗТ к аллергенам бруцелл у больных, переболевших бруцеллезом. Ставят с 15-20 дня заболевания. Бруцеллин в дозе 0,1 мл вводят строго внутрикожно в среднюю треть ладонной поверхности предплечья. Через 6—12 часов на месте инъекции появляется болезненный отек и покраснение, которые достигают максимального развития через 24 и 48 часов, после чего постепенно угасают.

Учет: 1) отрицательная реакция (—) — полное отсутствие местных изменений; 2) сомнительная реакция (±) — наличие асимметрии кожной складки по сравнению с контрольной; 3) слабо положительная ( + )—наличие слабо выраженного отека и красноты диаметром 2—3 см; 4) положительная реакция ( + + )—наличие отечности диаметром 4—5 см, иногда с аденитом; 5) резко положительная (+ + + ) —при отеке 6—8 см с аденитом.

Серодиагностика бруцеллеза.

Реакция Райта: ставят в начале 2-й недели болезни. Реакцию ставят не менее чем в пяти разведениях (1:50, 1:100, 1:200, 1:400 и 1:800) в объеме 1 мл каждое. В качестве антигена применяют единый бруцеллезный дианостикум. Перед употреблением диагностикум разводят в 10 раз карболизированным (0,5%) физиологическим раствором. Учет реакции производят через 24 часа путем сравнения степени просветления в опытных пробирках с соответствующим стандартом мутности, который готовят следующим образом. В 4 пробирки последовательно наливают 1, 2, 3 и 4 мл разведенного диагностикума, затем в том же порядке добавляют 3, 2 и 1 мл карболизированного физиологического раствора, в последнюю пробирку ничего не добавляют. После взбалтывания содержимого берут по 0,5 мл антигена каждой концентрации и 0,5 мл карболизированного физиологического раствора. Таким образом получают 4 пробирки стандарта мутности с различной степенью просветления (75% — 3—, 50% — 2 — и 25% — 1 — и отсутствие просветления), которые вместе с опытными пробирками помещают в термостат при t° 37° на 24 часа, после чего производят учет реакции. Диагностическим титром исследуемой сыворотки считается 50% агглютинации (2+).

Реакция Хеддльсона: стеклянную пластинку делят на 6 квадратов и наносят неразведенную испытуемую сыворотку в количествах от 0,08 до 0,01 мл и добавляют единый бруцеллезный диагностикум (по 0,03), кроме последней (5), в которую вносят 0,03 мл ИХН (контроль сыворотки). В 6-м квадрате находится 0,03 мл АГ и 0,03 мл ИХН (контроль диагностикума). Капли смешивают стеклянной палочкой. Учет: отсутствие агглютинации во всех дозах – отриц, наличие в 1 – сомнительная, во 2 – слабоположительная, в 3 и 4 – положительная, везде – резко положительная.

+проводят РИФ, РПГА, ИФА, РСК.

Последнее изменение этой страницы: 2017-02-08; Нарушение авторского права страницы

источник

В настоящее время в лабораториях используются следу­ющие диагностикумы.

1 .Бактериальный диагностикум сальмонелл брюшного тифа (или сальмонелл паратифа А и В, шигелл Флекснера, Зонне и др. бактерий семейства Enterobacteriaceae) является взвесью убитых бактерий соответствующего вида и приме­няется в реакции агглютинации для обнаружения антител в сыворотке больных, т.е для серодиагностики.

2. Сальмонеллезные 0-диагностикумы содержат О-антигены различных групп сальмонелл. Получают из взвеси убитых нагреванием сальмонелл. Применяются для выявления О-антител при сальмонеллезных инфекциях в реакции агглю­тинации с сывороткой больных (серодиагностика).

3. Сальмонеллезные Н-диагностикумы представляют собой жгутиковые антигены формалинизированных буль­онных культур сальмонелл соответствующих видов и исполь­зуются в реакции агглютинации для серодиагностики заболевания, т.е. для определения Н- антител в сываротке.

4. Vi — брюшнотифозный диагностикум — препарат, полу­ченный из S. typhi, содержащей Vi-антиген, воздействием формалина Применяется в реакции агглютинации для обнаружения Viантител в сыворотке для серодиагностики брюшноти­фозного бактерионосительства.

5. Диагностикум бруцеллезный единый – взвесь убитых бруцелл, подкрашенная метиленовым синим. Единый бруцеллезный диагностикум применяется для определения антител в сыворотках крови больных бруцеллезом людей и животных в реакциях агглютинации Хеддльсона и Райта (серодиагностика бруцеллеза).

6. Диагностикум риккетсиозный Провачека — взвесь убитых риккетсий Провачека. Применяется для определения антител в сыворотке больных эпидемическим сыпным тифом в реакции агглютинации риккетсий (РАР) – серодиагностика эпидемического сыпного тифа.

7. Кардиолипиновый антиген готовят из мышечной ткани сердца быка в виде спиртового экстракта с добавлением холестерина. Применяют в качестве неспецифического антигена для постановки реакции Вассермана с целью серодиагностики сифилиса.

8. Антиген Вассермана – специфический антиген из тканевых трепонем, обработанных ультразвуком. Применяется для постановки реакции Вассермана с целью серодиагностики сифилиса.

9. Эритроцитарный сальмонеллезный 0-диагностикум – взвесь эритроцитов с адсорбированными на них О-антигенами различных групп сальмонелл. Используется для постановки РПГА с сывороткой больного для серодиагностики сальмонеллезной инфекции.

10. Эритроцитарный брюшнотифозный Vi-диагностикум — эритроциты, сенси­билизированные очищенным Vi-антигеном S. typhi. Применяет­ся в РПГА для определения Viантител в сыворотке для серодиагностики брюшноти­фозного бактерионосительства.

11. Эритроцитарный дифтерийный диагностикум – эритроциты, сенсибилизированные дифтерийным анатоксином. Применяется в РПГА для определения антитоксических противодифтерийных антител в исследуемой сыворотке с целью оценки напряженности антитоксического иммунитета для выявления контингента лиц, подлежащих ревакцинации против дифтерии.

12. Эритроцитарный микоплазменный диагностикум — эритроциты, сенсибилизированные микоплазменным антигеном. Применяется для определения нарастания титра антимикоплазменных антител в парных сыворотках больного в РПГА с целью серодиагностики микоплазменных инфекций.

13. Эритроцитарный сыпнотифозный (риккетсиозный Провачека) диагностикум – эритроциты, сенсибилизированные риккетсиозным Провачека антигеном. Применяется в РПГА для определения антириккетсиозных Провачека антител в сыворотке больного (серодиагностика эпидемического сыпного тифа).

14. Эритроцитарный риккетсиозный Музера диагностикум — эритроциты, сенсибилизированные риккетсиозным Музера антигеном. Применяется в РПГА для определения антириккетсиозных Музера антител в сыворотке больного (серодиагностика эндемического сыпного тифа).

15. Эритроцитарный риккетсиозный Бернета диагностикум — эритроциты, сенсибилизированные риккетсиозным Бернета антигеном. Применяется в РПГА для определения антириккетсиозных Бернета антител в сыворотке больного (серодиагностика Ку-лихорадки).

16. Эритроцитарный антительный ботулинический диагностикум – эритроциты с адсорбированными на них антитоксическими антибутулиническими антителами. Используется для постановки РПГА с целью быстрого выявления экзотоксина в сыворотке больного (экспресс-метод диагностики ботулизма).

17.Эритроцитарный антительный противостолбнячный диагностикум – эритроциты с адсорбированными на них антитоксическими антистолбнячными антителами. Используется для постановки РПГА с целью быстрого выявления экзотоксина в сыворотке больного (экспресс- метод диагностики столбняка).

18. Эритроцитарный антительный противогангренозный диагностикум – эритроциты с адсорбированными на них антитоксическими противогангренозными антителами. Используется для постановки РПГА с целью быстрого выявления противогангренозного экзотоксина в сыворотке больного (экспресс-метод диагностики газовой гангрены).

19. Эритроцитарный антительный менингококковый диагностикум – эритроциты с адсорбированными на них антименингококковыми антителами. Применяется в РПГА для выявления менингококкового антигена в ликворе больного.

20. Гриппозный диагностикум представляет собой аллантоисную жидкость инфицированных вирусом гриппа (типов А, В) куриных эмбрионов и инактивированную. Диагностикум применяется при постановке РТГА или РСК с парными сыворотками больных для определения нарастания титра антител (серодиагностика гриппа)

21. Диагностикум вируса клещевого энцефалита получают из суспензии мозга белых мышей, зараженных вирусом кле­щевого энцефалита с последующей инактивацией вируса.

Диагностикум используется в РТГА или РСК для определения нарастания титра антител в парных сыворотках больного (серодиагностика клещевого энцефалита).

Читайте также:  Лимонника настойка инструкция по применению

источник

Диагностикум бруцеллезный жидкий для реакции агглютинации (РА), суспензия для диагностических целей, представляет собой взвесь бруцелл штамма B. Abortus 19 ВА концентрацией 2×1010 микробных клеток (м.к.)/мл в 12% растворе натрия хлорида, убитых нагреванием. Консервант – фенол.

Диагностикум представляет собой гомогенную взвесь сине-голубого цвета.

При хранении на дне образуется осадок сине-голубого цвета, легко разбивающийся при встряхивании, и слегка мутная надосадочная жидкость.

Диагностикум бруцеллезный жидкий для РА предназначен для серологической диагностики бруцеллеза у людей с помощью РА объемным (пробирочным) и пластинчатым (на стекле) методами в сыворотках крови людей.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ

Постановка реакции агглютинации для серологической диагностики бруцеллеза предусматривает соблюдение требований санитарных правил «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ

  1. Постановка реакции агглютинации на стекле.

Реакцию ставят на обычном тщательно вымытом обезжиренном стекле, которое расчерчивают на 5 квадратов по горизонтали (примерно 40×40 мм). В три квадрата вносят цельную исследуемую сыворотку в следующих объемах: 0,04; 0,02; 0,01 мл. В четвертый и пятый квадрат вносят 0,03 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, содержащего 0,5 % фенола. В первые три квадрата вносят 0,03 мл цельного диагностикума. В четвертый квадрат вносят 0,03 мл сыворотки (контроль сыворотки), в пятый – 0,03 мл цельного диагностикума (контроль диагностикума). Содержимое квадратов с помощью стеклянной палочки осторожно смешивают, начиная с наименьшего объема сыворотки. Стекло равномерно подогревают над пламенем спиртовки в течение 15-30 с.

Учет производят непосредственно после постановки реакции. Максимальный срок наблюдения – 8 мин.

Агглютинацию оценивают по четырехкрестной системе: 100 % агглютинации (4 креста) – полное просветление жидкости с крупно- и мелкозернистыми хлопьями; 75 % — (3 креста) – почти полное просветление жидкости с хорошо выраженными хлопьями; 50 % — (2 креста) – незначительное просветление жидкости с заметными хлопьями; 25 % — (1 крест) – мутная жидкость с едва заметной зернистостью; 0 % — отсутствие агглютинации – равномерно мутная жидкость. Реакция считается положительной при 50 % агглютинации (2 креста).

Реакция агглютинации на стекле является качественной, поэтому при необходимости определения титра специфических антител в исследуемой сыворотке следует проводить постановку реакции агглютинации пробирочным методом.

  1. Постановка реакции агглютинации пробирочным методом.

Для постановки реакции диагностикум разводят 1:10 0,9 % раствором натрия хлорида, содержащим 0,5 % фенола.

Исследуемую сыворотку разводят 0,9 % раствором натрия хлорида, содержащим 0,5 % фенола, получая разведения 1:25 до 1:400. Затем во все пробирки вносят по 0,5 мл разведенного 1:10 диагностикума, получая при этом разведения сыворотки от 1:50 до 1:800. Одновременно ставят контроли:

  • 1) 0,5 мл сыворотки в разведении 1:25 и 0,5 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, содержащего 0,5 % фенола – контроль сыворотки;
  • 2) 0,5 мл диагностикума в разведении 1:10 и 0,5 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, содержащего 0,5 % фенола – контроль диагностикума.

Реакцию ставят параллельно с контрольными разведениями диагностикума.

Для получения контрольных разведений диагностикум дополнительно разводят 1:1, для чего к 2 мл диагностикума, разведенного 1:10, добавляют 2 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, содержащего 0,5 % фенола.

В четыре пробирки вносят 0,9 % раствор натрия хлорида, содержащий 0,5 % фенола, в следующих количествах: в первую — 1 мл, во вторую – 0,75 мл, в третью – 0,5 мл, в четвертую – 0,25 мл, в пятую – раствор не вносят. Затем в пробирки, начиная со второй, вносят диагностикум в таких количествах, чтобы в каждой пробирке общий объем составил 1 мл, а именно: 0,25 мл, 0,5 мл, 0,75 мл и 1 мл.

Содержимое пробирок с контрольными разведениями диагностикума и с исследуемой сывороткой перемешивают встряхиванием и помещают в термостат при температуре (36±1) °С на 22-23 часа, затем оставляют при температуре (21±1) °С на 1 час.

Реакцию учитывают на темном фоне путем сравнения степени просветления в опытных пробирках с контрольными разведениями диагностикума.

При учете реакции в каждой пробирке опыта подбирают соответствующее ей по степени просветления контрольное разведение и отмечают степень агглютинации по следующей схеме:

источник

Монорецепторная сыворотка агглютинирующая сальмонеллезная (О) Пренадлежность к группе

Диагност. Ат, кот. получают в 3 этапа: на 1-ом выбираем сальмонелу (например S.typhimurium c Аг структурой О-1,4,5,12; Mi 1,2) нагревают на водяной бане для разрушения жгутиков Н-Аг,ост. Только О-Аг 1,4,5,12. На втором этапе проводят гипериммунизацию кроликов оставшимся О-Аг сальмонелл, у кролика образуются О-1,4,5,12 Ат . Это поливалентная сыворотка. На 3-ем этапе проводим истощение сыворотки по Кастеллани. Для этого и получают сыворотку добавляют предварительно нагретых на вод. Бане из той же сер.группы например S.hudelberg o-45,12 Аг, произойдет связь Аг и оставшегося О-1 Ат. Полученная сыворотка используется для сероидентификации сальмонел в РА на 3 этапе бакт. анализа.

Монорецепторная сыворотка агглютинирующая сальмонеллезная (Н) Определение серовара

Диагн. Ат получают в 2 этапа. На 1-м этапе берут S.paratyphi (чистую культуру микроба) . А О-1,2,12 на обработку формалином. Происходит разрушение О-Аг , второй этап гипериммунизация кролика оставшимся Аг и вырабатывается Ат. . Полученная сыворотка используется для сероидентификации сальмонел в РА на 3 этапе бакт. анализа.

Сухая агглютинирующая адсорбированная поливалентная сыворотка к шигеллам.

Ат содержащий препарат инактивир. Шигеллы нескольких видов. Диагн. Ат, полученное путем гипериммунизацией кролика убитыми шигеллами с опред. антигенной структурой. Используется для сероидентификации шигелл в РА на стекле.

Сибиреязвенная сыворотка лошадиная,меченная ФИТЦ-АТ,диагностический;

Получают гипериммунизацией лошадей возбудителем сибирской язвы, применяют в РИФ (прямой метод)

Кроличий античеловеческий глобулин,меченый ФИТЦ — АТ,диагностический

Получают гипериммунизацией кролика гамма-глобулинами человека, применяют в РИФ (непрямой метод)

Гриппозные диагностические сыворотки

Диагн. Ат,которая используется в РТГА или РСК для идентификации вируса гриппа опр.серотипа, при вирусологическом методе диагностики. При образовании пуговки серотип сыворотки соответствует серотипу вируса гриппа. При образовании зонтика НЕ соответствует.

Туляремийный диагностикум

АГ содержащий препарат из туляримийных бактерий Fransicella tularensis,получается путем инактивирования бактерий. Используется для – экспресс-диагностики туляримии в кровяно-капельной РА на стекле. На стекло: 1 капля крови, 1 капля дист.воды, 1 капля диагностикума. Если реация мгновенна, то титр 1:200, если через 30 минут 1:100.

Бруцеллезный диагностикум

АГ-содержащий препарат, содержит убитые нагреванием бруцеллы нескольких видов: abortus, melitensis, suis, ovis, canis.

Препарат подкрашен синькой или негциан-виолетом. Используется для РА на стекле в реакции Хаддилсона для серодиагностики бруцеллеза. Ели аглютинация происходит мгновенно, то человек болен бруцеллезом (титр АТ 1:200). Если раекция произошла через 30 сек. И позже,то надо повторить,титр 1:100, если агл-и нет, то человек здоров!

Дата добавления: 2015-02-22 ; просмотров: 35 | Нарушение авторских прав

источник

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к получению диагностических препаратов, и может быть использовано для получения диагностикума, предназначенного для выявления антител к бруцеллезному антигену в микрореакции агглютинации (МРА), в пробирочной реакции агглютинации (РА) и в пластинчатой реакции агглютинации на стекле. Способ включает смыв микробной массы Brucella abortus 19 ВА 0,9% раствором натрия хлорида, при этом концентрацию микробной массы доводят до 20-30 млрд. м.к./мл, инактивацию микробной взвеси 1% раствором формалина, которую осуществляют при температуре 22°С в течение 2-х часов, отмывку центрифугированием дважды при 7000 об/мин в течение 30 мин, окрашивание микробной взвеси 0,04% раствором гематоксилина Караци, который добавляют в равном объеме к полученному осадку после добавления 0,9% раствора натрия хлорида до первоначального объема, после чего смесь перемешивают, прогревают при температуре 56°С в течение 16-18 часов. После окрашивания взвесь центрифугируют при 2000 об/мин в течение 15 минут, затем супернатант центрифугируют при 7000 об/мин в течение 30 мин, затем осадок ресуспендируют в 0,9% растворе натрия хлорида и центрифугируют в тех же условиях 3-4 раза, после чего к осадку добавляют 0,1% раствор формалина до первоначального объема и стабилизатор в количестве 0,1 мл на 1 мл полученного диагностикума. Стабилизатор выбирают из группы 1,5% раствор поливинилпирролидона и 7% раствор сахарозы в соотношении 1:1 или 0,03% карбонатный буфер и 3% раствор сахарозы в соотношении 1:1. Далее диагностикум лиофильно высушивают. Способ позволяет получить диагностикум, имеющий более высокую специфичность, широкую область применения (микрореакция агглютинации, пробирочная реакция агглютинации и пластинчатая реакция агглютинации на стекле), длительный срок годности, удобный для транспортировки. При этом способ получения прост и доступен. 1 табл.

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к получению диагностических препаратов, и может быть использовано для получения диагностикума, предназначенного для выявления антител к бруцеллезному антигену в микрореакции агглютинации (МРА), в пробирочной реакции агглютинации (РА) и в пластинчатой реакции агглютинации на стекле.

Разработка и внедрение в практику здравоохранения диагностических бруцеллезных тест-систем, обладающих высокой активностью, специфичностью, удобных в использовании, отвечающих современным требованиям безопасности производства и доступных для применения в практических лабораториях, остается актуальной задачей.

Известен способ получения диагностикума бруцеллезного, жидкого, для РА объемным (пробирочным) и пластинчатым методами для обнаружения антител в сыворотках крови людей и животных, включающий смыв микробной массы штамма Brucella abortus 19 ВА 12% раствором натрия хлорида, получение микробной взвеси с концентрацией 20 млрд. м.к./мл, инактивацию микробных клеток нагреванием, консервирование 0,5% раствором фенола, окрашивание смесью 0,004% раствора бриллиантового зеленого и 0,002% раствора генцианвиолета (Фармакопейная статья. Диагностикум бруцеллезный, жидкий, для реакции агглютинации. ФС 42-3555-98). Диагностикум, полученный этим способом, представляет собой жидкость, с концентрацией 20 млрд. м.к./мл, с рабочим разведением 1:10.

Однако данный способ имеет следующие недостатки: диагностикум, получаемый этим способом, имеет недостаточно высокую специфичность, стабильность, используется только в реакциях агглютинации объемной и пластинчатой, поэтому имеет ограниченную область применения; имеет невысокое рабочее разведение (1:10), что приводит к большему расходу диагностикума, кроме того, диагностикум получают в жидком виде, что создает неудобство для потребителя, связанное с небольшим сроком его годности (2 года) и с необходимостью поддерживать определенную температуру при транспортировке препарата.

Целью изобретения является получение диагностикума, имеющего более высокую стабильность, специфичность, более широкую область применения, более длительный срок годности, более удобного в работе.

Поставленная цель достигается тем, что способ получения бруцеллезного диагностикума включает смыв микробной массы В. abortus 19 ВА 0,9% раствором натрия хлорида, доведение концентрации микробной массы до 20-30 млрд.м.к./мл, инактивацию микробной взвеси 1% раствором формалина, окрашивание микробной взвеси 0,04% раствором гематоксилина Караци, при определенных условиях. После окрашивания осуществляют отмывание микробной массы. После этого к осадку добавляют 0,1% раствор формалина до первоначального объема и стабилизатор в количестве 0,1 мл на 1 мл полученного диагностикума. Затем диагностикум лиофильно высушивают.

Сопоставительный анализ с протопипом показал, что предлагаемое техническое решение отличается от известного тем, что смыв микробной массы проводится 0,9% раствором натрия хлорида, при этом концентрацию микробной массы доводят до 20-30 млрд. м.к./мл, инактивацию проводят 1% раствором формалина, окрашивание — гематоксилином Караци, консервацию — формалином. Кроме того, способ включает добавление стабилизатора и лиофильное высушивание получаемого диагностикума.

Таким образом, предлагаемый способ соответствует критерию изобретения «новизна».

Проведенный анализ патентной и специальной литературы показал, что предлагаемый способ отличается не только от прототипа, но и от других технических решений в данной и смежных областях. Так, авторами не найдены способы получения диагностикумов, которые включают предлагаемые режимы, а именно, данные режимы позволяют достичь поставленную цель — получить диагностикум, который имеет высокую специфичность, расширенную область применения (МРА, РА объемная и пластинчатая на стекле), длительный срок годности, удобен в работе и при транспортировке. Кроме того, способ получения диагностикума прост в исполнении. Сроки получения результатов короче по времени с использованием получаемого диагностикума, экономически выгодны.

Данный способ может быть использован в лабораторном и промышленном производстве при выпуске диагностических препаратов.

Таким образом, предлагаемый способ соответствует критериям «изобретательский уровень» и «промышленная применимость».

Способ осуществляется следующим образом: для приготовления бруцеллезного диагностикума двухсуточную агаровую культуру вакцинного штамма В.abortus 19 ВА смывают 0,9% раствором натрия хлорида и доводят до концентрации 20-30 млрд. м.к./мл, добавляют равный объем 2% раствора формалина с таким расчетом, чтобы микробная взвесь содержала 1% формалина. Инактивацию проводят при температуре 22°С в течение двух часов. Через два часа формалинизированную микробную взвесь отмывают от формалина два раза путем центрифугирования при 7000 об/мин в течение 30 мин, соблюдая правила безопасности при работе с условно-заразным материалом. В стаканы с отмытой микробной взвесью наливают 0,9% раствор натрия хлорида до первоначального объема и равный объем 0,04% раствора гематоксилина Караци. Флакон со взвесью тщательно встряхивают, помещают в водяную баню, нагретую до температуры 56°С и оставляют на 16-18 часов. После указанной экспозиции окрашенную микробную взвесь освобождают от посторонних примесей (кусочки агара, крупные частицы краски и т.д.) центрифугированием при 2000 об/мин в течение 15 минут. Надосадочную жидкость, содержащую окрашенную микробную взвесь, разливают в чистые стаканы и центрифугируют при 7000 об/мин 30 мин. Супернатант сливают в раствор 3% хлорамина. Осадок, содержащий окрашенную микробную массу, ресуспендируют в 0,9% растворе натрия хлорида рН 7,2 и центрифугируют в тех же условиях. Отмывание окрашенных бактерий повторяют 3-4 раза, пока надосадочная жидкость не станет прозрачной. В стаканы с отмытыми окрашенными бактериями сначала наливают небольшой объем 0,1% раствора формалина, перемешивают, полученную взвесь переносят в стерильный градуированный флакон и доводят до первоначального объема. Затем добавляют стабилизатор 1,5% водный раствор поливинилпирролидона (ПВП) и 7% раствор сахарозы, взятые в соотношении 1:1, или 0,03% раствор карбонатного буфера и 3% раствор сахарозы, взятые в соотношении 1:1 в количестве 0,1 мл на 1 мл диагностикума, и лиофильно высушивают в стандартных условиях.

Получают стабильный сухой цветной антигенный бруцеллезный диагностикум с рабочим разведением от 1:16 до 1:18.

Пример 1. Двухсуточную агаровую культуру бруцелл штамма В. abortus 19 ВА смывают 0,9% раствором хлорида натрия и доводят до концентрации 20 млрд. м.к. в 1 мл взвеси по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Л.А.Тарасевича и инактивируют 1% раствором формалина. Инактивацию проводят при температуре 22°С в течение двух часов. Через два часа формалинизированную микробную взвесь отмывают от формалина два раза путем центрифугирования при 7000 об/мин в течение 30 мин, соблюдая правила безопасности при работе с условно-заразным материлом. В стаканы с отмытой микробной взвесью наливают 0,9% раствор натрия хлорида до первоначального объема. Во флаконы с отмытой микробной взвесью наливают равный объем 0,04% раствора гематоксилина Караци. Флакон со взвесью тщательно встряхивают, помещают в водяную баню, нагретую до температуры 56°С и оставляют на 16 часов. После указанной экспозиции окрашенную микробную взвесь освобождают от посторонних примесей (кусочки агара, крупные частицы краски и т.д.) центрифугированием при 2000 об/мин в течение 15 минут. Надосадочную жидкость, содержащую окрашенную микробную взвесь, разливают в чистые стаканы и центрифугируют при 7000 об/мин 30 мин. Супернатант сливают в 3% раствор хлорамина. Осадок, содержащий окрашенную микробную массу, ресуспендируют 0,9% раствором натрия хлорида рН 7,2 и центрифугируют при тех же условиях. Отмывание окрашенных бактерий повторяют 3 раза. В стаканы с отмытыми окрашенными бактериями наливают 0,1% раствор формалина, перемешивают, полученную взвесь переносят в стерильный градуированный флакон и доливают до первоначального объема. Перед лиофильным высушиванием добавляют стабилизатор — 1,5% водный раствор ПВП и 7% раствор сахарозы взятые в соотношении 1:1 в дозе 0,1 мл на 1 мл диагностикума.

Получают сухой диагностикум, у которого проверяют специфическую стерильность, активность, специфичность и устанавливают рабочее разведение. Приготовленный по предлагаемому способу диагностикум имеет рабочее разведение 1:16.

Активность бруцеллезного диагностикума сухого проверяли в МРА, РА объемной и пластинчатой на стекле с коммерческой бруцеллезной сывороткой (серия 7). В МРА титр антител составлял 1:3000±200, в РА объемной — 1:2400±800, в пластинчатой реакции на стекле сыворотка в дозах 0,04; 0,02; 0,01 дает положительную реакцию на четыре креста.

Специфичность полученного диагностикума проверяли в МРА и в РА объемной с коммерческими сыворотками: иерсиниозной серовара О:9 (серия 81) титр неспецифических антител составлял 1:720±80; холерной агглютинирующей О1 (серия 280) — 1:124±66; туляремийной (серия 3) — 1:45±5, тогда как с иерсиниозной серовара О:3 (серия 82), сальмонеллезной (серия 25), шигеллезной (серия 81), чумной (серия 55), эшерихиозной отрицательные результаты.

Пример 2. Двухсуточную агаровую культуру бруцелл штамма В.abortus 19 ВА смывают 0,9% раствором натрия хлорида и доводят до концентрации 30 млрд. м.к. в 1 мл взвеси по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Л.А.Тарасевича, и инактивируют 1% раствором формалина. Инактивацию проводят при температуре 22°С в течение двух часов. Через два часа формалинизированную микробную взвесь отмывают от формалина два раза путем центрифугирования при 7000 об/мин в течение 30 мин, соблюдая правила безопасности при работе с условно-заразным материалом. В стаканы с отмытой микробной взвесью наливают 0,9% раствор натрия хлорида до первоначального объема и равный объем 0,04% раствора гематоксилина Караци. Флакон со взвесью тщательно встряхивают, помещают в водяную баню, нагретую до температуры 56°С, и оставляют на 18 часов. После указанной экспозиции окрашенную микробную взвесь освобождают от посторонних примесей (кусочки агара, крупные частицы краски и т.д.) центрифугированием при 2000 об/мин в течение 15 минут. Надосадочную жидкость, содержащую окрашенную микробную взвесь, разливают в чистые стаканы и центрифугируют при 7000 об/мин 30 мин. Супернатант сливают в раствор 3% хлорамина. Осадок, содержащий окрашенную микробную массу, ресуспендируют 0,9% раствором натрия хлорида рН 7,2 и центрифугируют при тех же условиях. Отмывание окрашенных бактерий повторяют 4 раза. В стаканы с отмытыми окрашенными бактериями наливают 0,1% раствор формалина, перемешивают, полученную взвесь переносят в стерильный градуированный флакон и доводят до первоначального объема. Перед лиофильным высушиванием добавляют стабилизатор — 0,03% раствор карбонатного буфера и 3% раствор сахарозы, взятые в соотношении 1:1 в дозе 0,1 мл на 1 мл диагностикума.

Получают сухой диагностикум, у которого проверяют специфическую стерильность, активность, специфичность и устанавливают рабочее разведение. Приготовленный по предлагаемому способу диагностикум имеет рабочее разведение 1:18.

Активность бруцеллезного диагностикума сухого проверяли в МРА, РА объемной и пластинчатой на стекле с коммерческой бруцеллезной сывороткой (серия 7). В МРА титр антител составлял 1:3000±200, в РА объемной — 1:2400±800, в пластинчатой реакции на стекле сыворотка в дозах 0,04; 0,02; 0,01 дает положительную реакцию на четыре креста. Специфичность полученного диагностикума проверяли в МРА и в РА объемной с коммерческими сыворотками: иерсиниозной серовара О:9 (серия 81) титр неспецифических антител составлял 1:720±80; холерной агглютинирующей О1 (серия 280) — 1:124±66; туляремийной (серия 3) — 1:45±5, тогда как с иерсиниозной серовара О:3 (серия 82), сальмонеллезной (серия 25), шигеллезной (серия 81), чумной (серия 55), эшерихиозной ОКА (серия 74), псевдотуберкулезной (серия 77) показали отрицательные результаты.

Таким образом, диагностикумы с рабочими разведениями 1:16 и 1:18 по активности и специфичности не отличаются между собой. Результаты представлены в таблице. Как видно из таблицы, получаемый по предлагаемому способу диагностикум используется в реакциях: МРА, РА пробирочной и пластинчатой, тогда как диагностикум, полученный по способу-прототипу, используется только в РА пробирочной и пластинчатой. Полученный по предлагаемому способу диагностикум обладает активностью в МРА в разведении сыворотки 1:3200±200; в РА — 1:2400±800, не отличающуюся от прототипа. Специфичность сконструированного диагностикума с коммерческими сыворотками иерсиниозной серовара О:9 и холерной агглютинирующей О 1 выше у диагностикума, полученного по способу-прототипу, а с коммерческими иерсиниозной О:3, сальмонеллезной, чумной агглютинирующей, эшерихиозной, шигеллезной ОКА, псевдотуберкулезной отмечены отрицательные результаты, как у сконструированного диагностикума, так и у диагностикума, полученного по способу-прототипу.

Диагностикум, полученный по предлагаемому способу, более специфичен, имеет более широкую область применения по сравнению с диагностикумом, полученным по способу-протопипу. Кроме того, предлагаемый способ позволяет получить диагностикум с более длительным сроком годности (до 5 лет), удобным для транспортирования в любое время года при температуре от — 20°С до +25°С, тогда как диагностикум, полученный по способу-прототипу, — при температуре от 0°С до +25°С, исключающей замораживание. При этом способ получения прост и доступен.

Способ получения бруцеллезного диагностикума, отличающийся тем, что двухсуточную культуру бруцелл штамма Brucella abortus 19 ВА смывают 0,9%-ным раствором натрия хлорида и доводят до концентрации 20-30 млрд м.к. в 1 мл взвеси, затем инактивируют микробную взвесь 1%-ным раствором формалина при температуре 22°С в течение двух часов, далее проводят отмывание дважды центрифугированием при 7000 об/мин в течение 30 мин, добавляют 0,9%-ный раствор натрия хлорида до первоначального объема и равный объем 0,04%-ного раствора гематоксилина Караци, перемешивают, прогревают до температуры 56°С в течение 16-18 ч, после чего окрашенную взвесь центрифугируют при 2000 об/мин 15 мин, отделяют надосадочную жидкость и центрифугируют ее при 7000 об/мин 30 мин, полученный осадок ресуспендируют в 0,9%-ном растворе натрия хлорида и центрифугируют при тех же условиях 3-4 раза, затем к осадку добавляют 0,1%-ный раствор формалина до первоначального объема и стабилизатор в количестве 0,1 мл на 1 мл полученного диагностикума, выбранный из группы: 1,5%-ный раствор поливинилпирролидона и 7%-ный раствор сахарозы в соотношении 1:1 или 0,03%-ный карбонатный буфер и 3%-ный раствор сахарозы в соотношении 1:1, после чего диагностикум лиофильно высушивают.

источник

Владельцы патента RU 2269360:

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к получению диагностических препаратов, и может быть использовано для получения диагностикума, предназначенного для выявления антител к бруцеллезному антигену в микрореакции агглютинации (МРА), в пробирочной реакции агглютинации (РА) и в пластинчатой реакции агглютинации на стекле. Способ включает смыв микробной массы Brucella abortus 19 ВА 0,9% раствором натрия хлорида, при этом концентрацию микробной массы доводят до 20-30 млрд. м.к./мл, инактивацию микробной взвеси 1% раствором формалина, которую осуществляют при температуре 22°С в течение 2-х часов, отмывку центрифугированием дважды при 7000 об/мин в течение 30 мин, окрашивание микробной взвеси 0,04% раствором гематоксилина Караци, который добавляют в равном объеме к полученному осадку после добавления 0,9% раствора натрия хлорида до первоначального объема, после чего смесь перемешивают, прогревают при температуре 56°С в течение 16-18 часов. После окрашивания взвесь центрифугируют при 2000 об/мин в течение 15 минут, затем супернатант центрифугируют при 7000 об/мин в течение 30 мин, затем осадок ресуспендируют в 0,9% растворе натрия хлорида и центрифугируют в тех же условиях 3-4 раза, после чего к осадку добавляют 0,1% раствор формалина до первоначального объема и стабилизатор в количестве 0,1 мл на 1 мл полученного диагностикума. Стабилизатор выбирают из группы 1,5% раствор поливинилпирролидона и 7% раствор сахарозы в соотношении 1:1 или 0,03% карбонатный буфер и 3% раствор сахарозы в соотношении 1:1. Далее диагностикум лиофильно высушивают. Способ позволяет получить диагностикум, имеющий более высокую специфичность, широкую область применения (микрореакция агглютинации, пробирочная реакция агглютинации и пластинчатая реакция агглютинации на стекле), длительный срок годности, удобный для транспортировки. При этом способ получения прост и доступен. 1 табл.

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к получению диагностических препаратов, и может быть использовано для получения диагностикума, предназначенного для выявления антител к бруцеллезному антигену в микрореакции агглютинации (МРА), в пробирочной реакции агглютинации (РА) и в пластинчатой реакции агглютинации на стекле.

Разработка и внедрение в практику здравоохранения диагностических бруцеллезных тест-систем, обладающих высокой активностью, специфичностью, удобных в использовании, отвечающих современным требованиям безопасности производства и доступных для применения в практических лабораториях, остается актуальной задачей.

Известен способ получения диагностикума бруцеллезного, жидкого, для РА объемным (пробирочным) и пластинчатым методами для обнаружения антител в сыворотках крови людей и животных, включающий смыв микробной массы штамма Brucella abortus 19 ВА 12% раствором натрия хлорида, получение микробной взвеси с концентрацией 20 млрд. м.к./мл, инактивацию микробных клеток нагреванием, консервирование 0,5% раствором фенола, окрашивание смесью 0,004% раствора бриллиантового зеленого и 0,002% раствора генцианвиолета (Фармакопейная статья. Диагностикум бруцеллезный, жидкий, для реакции агглютинации. ФС 42-3555-98). Диагностикум, полученный этим способом, представляет собой жидкость, с концентрацией 20 млрд. м.к./мл, с рабочим разведением 1:10.

Однако данный способ имеет следующие недостатки: диагностикум, получаемый этим способом, имеет недостаточно высокую специфичность, стабильность, используется только в реакциях агглютинации объемной и пластинчатой, поэтому имеет ограниченную область применения; имеет невысокое рабочее разведение (1:10), что приводит к большему расходу диагностикума, кроме того, диагностикум получают в жидком виде, что создает неудобство для потребителя, связанное с небольшим сроком его годности (2 года) и с необходимостью поддерживать определенную температуру при транспортировке препарата.

Целью изобретения является получение диагностикума, имеющего более высокую стабильность, специфичность, более широкую область применения, более длительный срок годности, более удобного в работе.

Поставленная цель достигается тем, что способ получения бруцеллезного диагностикума включает смыв микробной массы В. abortus 19 ВА 0,9% раствором натрия хлорида, доведение концентрации микробной массы до 20-30 млрд.м.к./мл, инактивацию микробной взвеси 1% раствором формалина, окрашивание микробной взвеси 0,04% раствором гематоксилина Караци, при определенных условиях. После окрашивания осуществляют отмывание микробной массы. После этого к осадку добавляют 0,1% раствор формалина до первоначального объема и стабилизатор в количестве 0,1 мл на 1 мл полученного диагностикума. Затем диагностикум лиофильно высушивают.

Сопоставительный анализ с протопипом показал, что предлагаемое техническое решение отличается от известного тем, что смыв микробной массы проводится 0,9% раствором натрия хлорида, при этом концентрацию микробной массы доводят до 20-30 млрд. м.к./мл, инактивацию проводят 1% раствором формалина, окрашивание — гематоксилином Караци, консервацию — формалином. Кроме того, способ включает добавление стабилизатора и лиофильное высушивание получаемого диагностикума.

Таким образом, предлагаемый способ соответствует критерию изобретения «новизна».

Проведенный анализ патентной и специальной литературы показал, что предлагаемый способ отличается не только от прототипа, но и от других технических решений в данной и смежных областях. Так, авторами не найдены способы получения диагностикумов, которые включают предлагаемые режимы, а именно, данные режимы позволяют достичь поставленную цель — получить диагностикум, который имеет высокую специфичность, расширенную область применения (МРА, РА объемная и пластинчатая на стекле), длительный срок годности, удобен в работе и при транспортировке. Кроме того, способ получения диагностикума прост в исполнении. Сроки получения результатов короче по времени с использованием получаемого диагностикума, экономически выгодны.

Данный способ может быть использован в лабораторном и промышленном производстве при выпуске диагностических препаратов.

Таким образом, предлагаемый способ соответствует критериям «изобретательский уровень» и «промышленная применимость».

Способ осуществляется следующим образом: для приготовления бруцеллезного диагностикума двухсуточную агаровую культуру вакцинного штамма В.abortus 19 ВА смывают 0,9% раствором натрия хлорида и доводят до концентрации 20-30 млрд. м.к./мл, добавляют равный объем 2% раствора формалина с таким расчетом, чтобы микробная взвесь содержала 1% формалина. Инактивацию проводят при температуре 22°С в течение двух часов. Через два часа формалинизированную микробную взвесь отмывают от формалина два раза путем центрифугирования при 7000 об/мин в течение 30 мин, соблюдая правила безопасности при работе с условно-заразным материалом. В стаканы с отмытой микробной взвесью наливают 0,9% раствор натрия хлорида до первоначального объема и равный объем 0,04% раствора гематоксилина Караци. Флакон со взвесью тщательно встряхивают, помещают в водяную баню, нагретую до температуры 56°С и оставляют на 16-18 часов. После указанной экспозиции окрашенную микробную взвесь освобождают от посторонних примесей (кусочки агара, крупные частицы краски и т.д.) центрифугированием при 2000 об/мин в течение 15 минут. Надосадочную жидкость, содержащую окрашенную микробную взвесь, разливают в чистые стаканы и центрифугируют при 7000 об/мин 30 мин. Супернатант сливают в раствор 3% хлорамина. Осадок, содержащий окрашенную микробную массу, ресуспендируют в 0,9% растворе натрия хлорида рН 7,2 и центрифугируют в тех же условиях. Отмывание окрашенных бактерий повторяют 3-4 раза, пока надосадочная жидкость не станет прозрачной. В стаканы с отмытыми окрашенными бактериями сначала наливают небольшой объем 0,1% раствора формалина, перемешивают, полученную взвесь переносят в стерильный градуированный флакон и доводят до первоначального объема. Затем добавляют стабилизатор 1,5% водный раствор поливинилпирролидона (ПВП) и 7% раствор сахарозы, взятые в соотношении 1:1, или 0,03% раствор карбонатного буфера и 3% раствор сахарозы, взятые в соотношении 1:1 в количестве 0,1 мл на 1 мл диагностикума, и лиофильно высушивают в стандартных условиях.

Получают стабильный сухой цветной антигенный бруцеллезный диагностикум с рабочим разведением от 1:16 до 1:18.

Пример 1. Двухсуточную агаровую культуру бруцелл штамма В. abortus 19 ВА смывают 0,9% раствором хлорида натрия и доводят до концентрации 20 млрд. м.к. в 1 мл взвеси по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Л.А.Тарасевича и инактивируют 1% раствором формалина. Инактивацию проводят при температуре 22°С в течение двух часов. Через два часа формалинизированную микробную взвесь отмывают от формалина два раза путем центрифугирования при 7000 об/мин в течение 30 мин, соблюдая правила безопасности при работе с условно-заразным материлом. В стаканы с отмытой микробной взвесью наливают 0,9% раствор натрия хлорида до первоначального объема. Во флаконы с отмытой микробной взвесью наливают равный объем 0,04% раствора гематоксилина Караци. Флакон со взвесью тщательно встряхивают, помещают в водяную баню, нагретую до температуры 56°С и оставляют на 16 часов. После указанной экспозиции окрашенную микробную взвесь освобождают от посторонних примесей (кусочки агара, крупные частицы краски и т.д.) центрифугированием при 2000 об/мин в течение 15 минут. Надосадочную жидкость, содержащую окрашенную микробную взвесь, разливают в чистые стаканы и центрифугируют при 7000 об/мин 30 мин. Супернатант сливают в 3% раствор хлорамина. Осадок, содержащий окрашенную микробную массу, ресуспендируют 0,9% раствором натрия хлорида рН 7,2 и центрифугируют при тех же условиях. Отмывание окрашенных бактерий повторяют 3 раза. В стаканы с отмытыми окрашенными бактериями наливают 0,1% раствор формалина, перемешивают, полученную взвесь переносят в стерильный градуированный флакон и доливают до первоначального объема. Перед лиофильным высушиванием добавляют стабилизатор — 1,5% водный раствор ПВП и 7% раствор сахарозы взятые в соотношении 1:1 в дозе 0,1 мл на 1 мл диагностикума.

Получают сухой диагностикум, у которого проверяют специфическую стерильность, активность, специфичность и устанавливают рабочее разведение. Приготовленный по предлагаемому способу диагностикум имеет рабочее разведение 1:16.

Активность бруцеллезного диагностикума сухого проверяли в МРА, РА объемной и пластинчатой на стекле с коммерческой бруцеллезной сывороткой (серия 7). В МРА титр антител составлял 1:3000±200, в РА объемной — 1:2400±800, в пластинчатой реакции на стекле сыворотка в дозах 0,04; 0,02; 0,01 дает положительную реакцию на четыре креста.

Специфичность полученного диагностикума проверяли в МРА и в РА объемной с коммерческими сыворотками: иерсиниозной серовара О:9 (серия 81) титр неспецифических антител составлял 1:720±80; холерной агглютинирующей О1 (серия 280) — 1:124±66; туляремийной (серия 3) — 1:45±5, тогда как с иерсиниозной серовара О:3 (серия 82), сальмонеллезной (серия 25), шигеллезной (серия 81), чумной (серия 55), эшерихиозной отрицательные результаты.

Пример 2. Двухсуточную агаровую культуру бруцелл штамма В.abortus 19 ВА смывают 0,9% раствором натрия хлорида и доводят до концентрации 30 млрд. м.к. в 1 мл взвеси по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Л.А.Тарасевича, и инактивируют 1% раствором формалина. Инактивацию проводят при температуре 22°С в течение двух часов. Через два часа формалинизированную микробную взвесь отмывают от формалина два раза путем центрифугирования при 7000 об/мин в течение 30 мин, соблюдая правила безопасности при работе с условно-заразным материалом. В стаканы с отмытой микробной взвесью наливают 0,9% раствор натрия хлорида до первоначального объема и равный объем 0,04% раствора гематоксилина Караци. Флакон со взвесью тщательно встряхивают, помещают в водяную баню, нагретую до температуры 56°С, и оставляют на 18 часов. После указанной экспозиции окрашенную микробную взвесь освобождают от посторонних примесей (кусочки агара, крупные частицы краски и т.д.) центрифугированием при 2000 об/мин в течение 15 минут. Надосадочную жидкость, содержащую окрашенную микробную взвесь, разливают в чистые стаканы и центрифугируют при 7000 об/мин 30 мин. Супернатант сливают в раствор 3% хлорамина. Осадок, содержащий окрашенную микробную массу, ресуспендируют 0,9% раствором натрия хлорида рН 7,2 и центрифугируют при тех же условиях. Отмывание окрашенных бактерий повторяют 4 раза. В стаканы с отмытыми окрашенными бактериями наливают 0,1% раствор формалина, перемешивают, полученную взвесь переносят в стерильный градуированный флакон и доводят до первоначального объема. Перед лиофильным высушиванием добавляют стабилизатор — 0,03% раствор карбонатного буфера и 3% раствор сахарозы, взятые в соотношении 1:1 в дозе 0,1 мл на 1 мл диагностикума.

Получают сухой диагностикум, у которого проверяют специфическую стерильность, активность, специфичность и устанавливают рабочее разведение. Приготовленный по предлагаемому способу диагностикум имеет рабочее разведение 1:18.

Активность бруцеллезного диагностикума сухого проверяли в МРА, РА объемной и пластинчатой на стекле с коммерческой бруцеллезной сывороткой (серия 7). В МРА титр антител составлял 1:3000±200, в РА объемной — 1:2400±800, в пластинчатой реакции на стекле сыворотка в дозах 0,04; 0,02; 0,01 дает положительную реакцию на четыре креста. Специфичность полученного диагностикума проверяли в МРА и в РА объемной с коммерческими сыворотками: иерсиниозной серовара О:9 (серия 81) титр неспецифических антител составлял 1:720±80; холерной агглютинирующей О1 (серия 280) — 1:124±66; туляремийной (серия 3) — 1:45±5, тогда как с иерсиниозной серовара О:3 (серия 82), сальмонеллезной (серия 25), шигеллезной (серия 81), чумной (серия 55), эшерихиозной ОКА (серия 74), псевдотуберкулезной (серия 77) показали отрицательные результаты.

Таким образом, диагностикумы с рабочими разведениями 1:16 и 1:18 по активности и специфичности не отличаются между собой. Результаты представлены в таблице. Как видно из таблицы, получаемый по предлагаемому способу диагностикум используется в реакциях: МРА, РА пробирочной и пластинчатой, тогда как диагностикум, полученный по способу-прототипу, используется только в РА пробирочной и пластинчатой. Полученный по предлагаемому способу диагностикум обладает активностью в МРА в разведении сыворотки 1:3200±200; в РА — 1:2400±800, не отличающуюся от прототипа. Специфичность сконструированного диагностикума с коммерческими сыворотками иерсиниозной серовара О:9 и холерной агглютинирующей О 1 выше у диагностикума, полученного по способу-прототипу, а с коммерческими иерсиниозной О:3, сальмонеллезной, чумной агглютинирующей, эшерихиозной, шигеллезной ОКА, псевдотуберкулезной отмечены отрицательные результаты, как у сконструированного диагностикума, так и у диагностикума, полученного по способу-прототипу.

Диагностикум, полученный по предлагаемому способу, более специфичен, имеет более широкую область применения по сравнению с диагностикумом, полученным по способу-протопипу. Кроме того, предлагаемый способ позволяет получить диагностикум с более длительным сроком годности (до 5 лет), удобным для транспортирования в любое время года при температуре от — 20°С до +25°С, тогда как диагностикум, полученный по способу-прототипу, — при температуре от 0°С до +25°С, исключающей замораживание. При этом способ получения прост и доступен.

Способ получения бруцеллезного диагностикума, отличающийся тем, что двухсуточную культуру бруцелл штамма Brucella abortus 19 ВА смывают 0,9%-ным раствором натрия хлорида и доводят до концентрации 20-30 млрд м.к. в 1 мл взвеси, затем инактивируют микробную взвесь 1%-ным раствором формалина при температуре 22°С в течение двух часов, далее проводят отмывание дважды центрифугированием при 7000 об/мин в течение 30 мин, добавляют 0,9%-ный раствор натрия хлорида до первоначального объема и равный объем 0,04%-ного раствора гематоксилина Караци, перемешивают, прогревают до температуры 56°С в течение 16-18 ч, после чего окрашенную взвесь центрифугируют при 2000 об/мин 15 мин, отделяют надосадочную жидкость и центрифугируют ее при 7000 об/мин 30 мин, полученный осадок ресуспендируют в 0,9%-ном растворе натрия хлорида и центрифугируют при тех же условиях 3-4 раза, затем к осадку добавляют 0,1%-ный раствор формалина до первоначального объема и стабилизатор в количестве 0,1 мл на 1 мл полученного диагностикума, выбранный из группы: 1,5%-ный раствор поливинилпирролидона и 7%-ный раствор сахарозы в соотношении 1:1 или 0,03%-ный карбонатный буфер и 3%-ный раствор сахарозы в соотношении 1:1, после чего диагностикум лиофильно высушивают.

источник

Понравилась статья? Поделить с друзьями:
Классы МПК: A61K39/10 Brucella; Bordetella, например коклюша
G01N33/569 микроорганизмов, например протозоа, бактерий, вирусов
Автор(ы): Андреевская Нина Михайловна (RU) , Михайлова Вера Александровна (RU) , Голубинский Евгений Павлович (RU) , Калиновский Александр Иннокентьевич (RU) , Михайлов Леонид Михайлович (RU) , Белобородов Юрий Владимирович (RU) , Каретникова Эльвира Семеновна (RU) , Репина Людмила Петровна (RU) , Игнатьева Ирина Александровна (RU) , Юденич Сергей Валентинович (RU)
Патентообладатель(и): Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока (RU)
Приоритеты: